PCR污染原因以及监测

对特定的DNA片段起到放大扩增作用的一种分子生物学技术，被称为聚合酶链式反应。其可以被当作生物体外的特殊DNA复制，能够大幅增加微量的DNA。1971年Khorana首先提出设想，1985年Mullis发明了聚合酶链反应。下面就让小编为你介绍一下PCR反应污染原因以及监测。

较大扩增能力与极高的灵敏性是PCR反应所具有的Zda特点，然而，其有一个令人头痛的问题，就是其非常容易受到污染。哪怕污染极其微量，都可能导致发生假阳性。

污染原因

标本间交叉污染：

1.一些微生物标本特别是病毒，能够随着或者生成气溶胶而扩散，使得标本相互交叉污染。

2.在提取标本核酸模板的过程中，因为吸样枪受到污染，从而使得标本相互交叉污染。

3.在放置标本时，因为容器密封不严，标本溢出，和容器的外粘有标本相互交叉污染。

4.收集标本的容器受到污染

PCR试剂的污染：

在在PCR试剂配制过程中，加样枪、容器、双蒸水及其它溶液受到PCR核酸模板污染。

PCR扩增产物污染：

PCR反应中Z主要也是Z常见的污染问题是PCR扩增产物污染。由于PCR产物具有非常大的拷贝量（通常为1013拷贝/ml），相比于PCR检测数个拷贝的极限要高出许多许多，因此只要是极微量的PCR产物污染，就很有可能导致假阳性。气溶胶污染是一种Z有可能也是Z容易被忽视的导致PCR产物污染的形式。气溶胶能够在在空气与液体面摩擦时形成，当操作的时候，摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶从而导致污染。

实验室中克隆质粒的污染：

这个问题在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室比较常见。由于在单位容积内克隆质粒有相当高的含量，除此以外，在在纯化过程中需要用到的试剂和材料很多，并且，在活细胞内的质粒，由于活细胞具有非常强大的生命力以及非常容易生长繁殖，因此，可能会造成非常大的污染。

污染的监测

时刻注意污染的监测对于一个好的实验室是非常必要的，对什么原因导致的污染以及有无污染进行考虑，从而为采取措施提供便利，避免和消除污染。

一个好的实验室，要时刻注意污染的监测，考虑有无污染是什么原因造成的污染，以便采取措施，防止和消除污染。

1、阴性对照：

只要进行PCR实验，就一定要做阴性对照，阴性对照包含：

（1）试剂对照：不将模板DNA或RNA加入到PCR试剂中，进行PCR扩增，对试剂是否污染进行监测。

（2）标本对照：血清就是被检的标本，就使用鉴定后的正常血清作对照。组织细胞就是被检的标本，就使用相应的组织细胞作对照。

2、阳性对照：

PCR阳性对照对于被建立PCR反应实验室及一般的检验单位都是必需设有的，对于产物条带位置及大小是否合乎理论要求以及

PCR反应是否成功，PCR阳性对照都是一个重要的参考标志。阳性对照需要选择的标本需要满足经各种鉴定、重复性好、扩增度中等的要求。若使用重组质粒为阳性对照，那么含量低一点比较好（100个拷贝以下）。然而阳性对照特别是高浓度阳性标本以及重组质粒，其很有可能导致检测或者扩增的样品的污染。

3.选择不同区域的引物进行PCR扩增

4.重复性试验