表面等离子共振仪调和方法
表面等离子共振技术,简称SPR,是从20世纪90年代发展起来的一种新技术,对在生物传感芯片(biosensor chip)上配位体与分析物之间的相互作用情况的检测是SPR应用原理。在各个领域得到广泛地应用。
原料
有如下几种亲和分子:
1.凝集素–聚糖/糖蛋白(Lectin–Polysacharride/Glycoprotein)
2.蛋白质–小分子(Protein–Small Molecule)
3.蛋白质–核酸(Protein–Nucleic Acid)
4.细胞–配体(Cell–Ligand)
5.蛋白质–蛋白质(Protein–Protein)
6.多肽–受体(Peptide–Receptor)
7.抗体–抗原(Antibody–Antigen)
8.膜受体–配体(Membrane Receptor–Ligand)
调和方法
任何一对亲和分子,一个(分析物)在溶液中放置,另一个(靶分子)在生物传感器表面键合。如果在靶分子键合的生物传感器表面有含有分析物的溶液流经。就会生成亲和性复合物。
双通道流动注射分析式微射流系统为SensiQ所配备,有85nL流动池在其内。一次性的SPR生物传感器为SensiQ所使用,能够简便地装卸。有单层的羧基化寡聚环氧乙烷(Carboxylated Oligoethyleneoxide)基质包被于生物传感器表面,能够对多种生物分子进行键合,并且对非特异性结合及变性进行有效地阻止。靶生物分子既能够在固相生物传感器表面键合,又能够在液相中存在,这种方式使两种亲和分子间的接触性得以增进,同时使由于人为因素所造成的动力学分析的复杂化得以避免。
SensiQ关于实验设计的改进具备多种键合方案,从而对生物分子的附着起支持作用。用EDC/NHS进行胺偶联是Z常用的偶联方式。亦可使用例如顺丁烯二酰亚胺-硫醇(Maleimide-thiol),还原胺化,酰肼-醛(Hydrazide-aldehyde),亲和力捕获等其它键合方式。适当的参照曲线能够通过SensiQ双通道检测中的一个通道来生成。当固定好表面化学物之后,将Z多250 μl的样品加入,缓冲液流经生物传感器表面时会有稳定的基线产生,通过自动化控制完成样品注入和计时。用户能够通过实验设置向导功能记录多次注射周期,并具备高重复性。
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