液相色谱串联质谱仪操作指南

样品前处理：数据质量的底层逻辑

在LC-MS/MS分析中，业内常说“垃圾进，垃圾出”（Garbage in, Garbage out）。样品前处理的精细程度直接决定了回收率与基质效应（Matrix Effect）。对于复杂生物基质或环境样本，单纯的稀释法往往难以满足高灵敏度需求。

操作者通常会根据目标化合物的极性与酸碱性，在蛋白沉淀（PPT）、固相萃取（SPE）与液液萃取（LLE）之间进行权衡。例如，在使用SPE时，不仅要关注洗脱液的极性，更要关注平衡步骤的pH值稳定性。基质效应的控制是核心，建议在方法开发阶段通过柱后注入法或标准添加法评估基质效应，确保基质因子处于0.8-1.2的理想区间。

液相系统的精细调控：分离速度与离子化效率

液相色谱（LC）不仅是分离手段，更是质谱（MS）的进样系统。在高通量检测中，超高效液相色谱（UHPLC）的亚2微米填料已成为标配，其背压通常在8000-15000 psi之间。

流动相的选择需兼顾色谱行为与质谱兼容性。含非挥发性盐（如磷酸盐）的缓冲液是质谱的“天敌”，易导致离子源结垢。通常采用甲酸、乙酸及其铵盐来调节pH值。下表总结了常用流动相添加剂对正/负离子模式灵敏度的影响倾向：

质谱参数的深度优化：MRM模式的精髓

进入质谱环节，多反应监测（MRM）是定量分析的核心。对于特定的目标物，选择能量合适的定量离子对与定性离子对是关键。在优化碰撞能量（CE）时，建议以2-5 eV为步长进行梯度扫描，寻找产生特征碎片离子的“黄金电压”。

除了离子源温度（TEM）和喷雾电压（IS），帘幕气（CUR）与碰撞气（CAD）的流量设定往往被新手忽视。较高的帘幕气流量能有效防止离子源污染，但过高则会阻碍离子进入毛细管。在处理大流速（如0.5 mL/min以上）的液相端时，必须匹配足够的辅助气（Gas 2）以确保溶剂彻底脱溶剂化。

系统维护与稳定性表征：从业者的日常

LC-MS/MS的高维护成本要求操作者具备预判能力。真空度的微小波动或本底噪音的抬升，往往预示着机械泵油需要更换或离子源内腔需要清洗。

在每日开机序列中，运行系统适用性测试（SST）是不可逾越的环节。通过进样标准品，监控以下核心指标的变化：

1. 保留时间漂移：应控制在±0.1 min内，否则需检查流动相配比或柱温箱稳定性。
2. 峰面积RSD%：连续6针重复进样，RSD应小于5%（痕量分析可放宽至10%）。
3. 质谱分辨率与质量轴：每两周或环境温度波动超过5℃时，需重新进行质量轴校准（Mass Calibration）。

针对工业级高通量实验室，建议建立耗材生命周期档案。色谱柱的使用次数、一级预滤芯的更换频率以及ESI毛细管的切割记录，均应数字化管理。这种从经验驱动向数据驱动的转变，是保证检测结果具备法律溯源性与行业公信力的基石。