大鼠BTC ELISA检测指南：从样本准备到结果分析

　　大鼠BTC ELISA检测指南：从样本准备到结果分析

　　BS-3421大鼠β细胞素(BTC)ELISA试剂盒

　　根据您提供的信息，我为您整理了一份关于大鼠β细胞素(βTC)ELISA检测的指南，涵盖了从样本准备到结果分析的完整流程。

　　检测原理

　　该试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)‌。其核心原理是：在包被了抗体的微孔板中，加入样本后，样本中的βTC会与包被抗体结合，随后加入酶标记抗体形成“夹心”复合物。经过洗涤后，加入底物TMB显色，颜色的深浅与样本中βTC的浓度呈正相关，通过测定吸光度(OD值)来计算含量‌。

　　试剂盒组成

　　试剂盒通常包含以下主要组分‌：

　　酶标包被板‌：预包被了特异性抗体。

　　标准品‌：用于绘制标准曲线。

　　酶标试剂‌：即酶标记的检测抗体。

　　样品稀释液‌：用于稀释样本。

　　显色剂A液和B液‌：即TMB底物溶液。

　　终止液‌：用于终止反应。

　　浓缩洗涤液‌：需稀释后使用。

　　样本准备

　　样本的类型和处理方法会直接影响检测结果的准确性‌。以下是大鼠βTC检测常见的样本类型及处理方法：

　　血清‌：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心(2000-3000转/分)20分钟左右，仔细收集上清。保存过程中如出现沉淀，应再次离心‌。

　　血浆‌：需根据要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心(2000-3000转/分)20分钟左右，仔细收集上清‌。

　　组织匀浆‌：将组织加入一定量的PBS(PH7.4)捣碎，离心后取上清液‌。

　　细胞培养上清‌：检测分泌性成分时，用无菌管收集，离心后取上清‌。

　　重要注意事项‌：

　　样本应分装并贮存于-70℃，避免反复冻融。

　　检测前，样本应缓慢恢复至室温(25℃±3℃)，并轻柔混匀。

　　样本中可见的沉淀必须去除，不要使用严重溶血或高血脂的样本。

　　实验步骤

　　以下是一个通用的ELISA操作流程，具体步骤请以您购买的试剂盒说明书为准‌：

　　加样‌：向微孔中加入标准品和待测样本。

　　孵育‌：在适当温度下孵育，使抗原与抗体结合。

　　加酶标抗体‌：加入酶标记的检测抗体，形成“夹心”复合物。

　　洗涤‌：洗涤板子，去除未结合的酶标抗体。

　　显色‌：加入TMB底物溶液，酶催化产生颜色反应。

　　终止‌：加入终止液终止反应。

　　读数‌：使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)。

　　结果分析

　　通过测定各孔的OD值，并依据标准曲线，即可计算出样本中βTC的含量‌。试剂盒的检测范围通常为9.375-600 pg/mL，低检测限约为2.4 pg/mL‌。

　　关键注意事项

　　为了确保实验成功，请务必注意以下几点‌：

　　试剂准备‌：检测前请将所有试剂和样本恢复至室温。如果浓缩试剂出现结晶，需37℃温浴至溶解。

　　避免混用‌：请勿与其他厂家的试剂盒或组分混合使用。

　　样本稀释‌：若样本浓度过高，需用PBS(PH7.4)或试剂盒提供的稀释液进行适当稀释。

　　干扰因素‌：样本中可能存在的异嗜抗体会干扰结果，需在检测前排查。

　　结果可比性‌：不同检测方法的结果不具有直接可比性。

　　希望这份指南能帮助您顺利完成大鼠βTC的ELISA检测。请务必以您手中试剂盒的官方说明书为准进行操作。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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