WB效率翻倍｜NovaPAGE预制胶新品，50份试用+早鸟尝鲜

MES与MOPS缓冲液如何选择？

取决于目标蛋白大小及所需电泳速度。

• MES缓冲液适合低分子量蛋白的分离。其迁移速度快，小蛋白能高效分离，且避免扩散或跑出凝胶。

• MOPS缓冲液适合中高分子量蛋白的分离。其电导率较低，迁移速度慢，能为大蛋白提供更好的分辨率。

推荐电压是多少？

NovaPAGE胶推荐在恒压200V下电泳。若观察到轻微边缘效应（外侧泳道弯曲），可将电压降至150V并延长电泳时间（约35-40分钟）。使用MOPS缓冲液也有助于减轻边缘效应。

样品制备有哪些要点？

使用Bis-Tris胶时，建议使用与Bis-Tris中性pH环境兼容的样品缓冲液，如NuPAGE? LDS上样缓冲液(4X)，并添加合适的还原剂（如NuPAGE样品还原剂(10X)）。样品与上述上样缓冲液、还原剂混匀后，70°C加热10分钟，以确保蛋白充分变性，同时避免煮沸可能导致的蛋白降解。为了获得最佳结果，建议样品在实验当天进行还原处理，避免提前还原后冷冻保存。

常见问题如何快速排查？

• 微笑条带——常见原因是过热

  排查方案：缓冲液新鲜（配制一周内使用）且正确配制。建议控制电泳温度为20-25°C，可置于冰浴中电泳以帮助散热。同时注意电泳液液面不要过低，以帮助散热。

• 拖尾/条带弥散/条带模糊——常见原因是样品质量与上样量。

  排查方案：

  1. 样品盐浓度过高易导致拖尾，需脱盐或稀释样品。

  2. 上样量过大易造成拖尾，建议每孔上样10-20 μg总蛋白。

  3. 变性不充分可导致条带模糊，需确保70°C加热10分钟。难变性蛋白可延长至15分钟（避免煮沸）。

  4. 蛋白降解也会导致拖尾，建议在裂解液中添加蛋白酶抑制剂，并保持样品低温。

  5. DNA污染可能导致垂直条纹和拖尾，可以在样品制备时加入DNase或超声处理去除核酸污染。

• 泳道或条带歪斜——常见原因是设备未正确安装。

  排查方案：确保电泳槽水平放置，卡夹稳固地装入电极。电泳槽倾斜或胶受力不均可能导致条带跑偏。检查缓冲液液面是否正确加至刻度线。

NovaPAGE胶转膜有特殊注意事项吗？

转膜缓冲液中高浓度甲醇（例如20%）可能导致Bis-Tris胶收缩，从而引起条带变形并降低转膜效率。为避免此问题，建议将甲醇浓度控制在10%-15%。

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