谈一谈荧光定量PCR管的实验原理及操作使用

来源：本生（天津）健康科技有限公司更新时间：2022-10-19 14:40:13 阅读量：844

导读：实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)是指同时监测PCR过程的能力。因此，可以在PCR扩增过程中收集数据，而不是在PCR后。这给基于PCR的DNA和RNA定量方法带来了革命性的变化。

　　荧光定量PCR管的实验原理：

　　实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)是指同时监测PCR过程的能力。因此，可以在PCR扩增过程中收集数据，而不是在PCR后。这给基于PCR的DNA和RNA定量方法带来了革命性的变化。在实时荧光定量PCR(qPCR)中，反应的特征是在循环中检测到目标扩增的时间点，而不是在一定循环数后目标分子的累积扩增量。目标核酸的初始拷贝数越高，荧光显著增加的速度越快。相反，终点试验(也称为“读数板试验”)测量PCR循环结束时PCR产物的累积量。

　　荧光定量PCR管的操作使用：

　　1、样品制备

　　根据实验需要，向cDNA模板中加水进行适当稀释，涡旋混合和离心，根据检测到的样本和基因的实际数量计算样本添加系统，根据系统添加ddH2O、qPCRmix、引物，制备一管混合、涡旋混合、离心。准备适量的qPCR八排板或96孔板。在这里，我们使用八排试管，将它们放在冰上进行操作，然后将上一步中混合的混合物压至19μL，每孔添加一μL到八排孔中。

　　2、增加模板

　　向每个孔添加1μLcDNA模板。添加样品后，盖住八排管盖，并尝试从孔边缘压缩管盖。涡流混合和离心以去除气泡。

　　3、计算机响应

　　操作机器前的程序设置如下：设置反应温度，设置孔板信息，将样品放入仪器，开始反应。

　　4、导出数据

　　反应后，获得qPCR数据。根据溶解曲线，检查数据的有效性，将数据导出为Excel文件并保存。

　　5、实验结束

　　实验结束后，打开qPCR仪器，取出8根相连的试管，盖上qPCR仪器并关闭计算机和仪器。

标签：荧光定量PCR管 RNA定量方法

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