荧光定量PCR(qPCR)方法用途及说明

【概述】荧光定量PCR(qPCR)方法用途及说明

　　荧光定量PCR法(qPCR)：是在常规PCR基础上，将『针对支原体特异性保守序列的探针』做荧光标记，使PCR扩增后的产物带有荧光，利用荧光信号的变化和配套软件，进行DNA扩增反应的实时监测，简称qPCR。

　　(经典法)

　　1) 符合欧洲药典、药典要求，更适合细胞，CAR-T，抗体药、疫苗等临床项目申报和质检。

　　2)样本需先做DNA抽提。抽提后样本加入量为10μl。

　　3) 厂家可协助完善方法验证步骤。

【实验/设备条件】支原体荧光定量PCR(qPCR)检测试剂盒(一步法)

　　1)适合科研单位检测，或单位内检，用荧光定量PCR(qPCR)法检测细胞或其他生物基质。

　　2) 比药典操作标准合并了一步，(将内控对照试剂预先混合在PCR mix试剂中)，操作更简洁。

　　3)样本量为2μl，灵敏度为50个基因组拷贝/反应。结果准确。

【样品提取】

【实验/操作方法】优点：

　　①灵敏度高、特异性强。

　　②时间短，2-3小时出结果。

　　③检测结果可定量。

　　④操作简便。

　　缺点：

　　①对于已做支原体灭活处理的样品，由于支原体DNA仍旧存在其中，PCR结果会出现假阳性。(可用培养法做补充验证)

　　②不同厂家生产的试剂盒质量差异巨大(由于引物及内在设计不同)，需谨慎选择，尽量在专业人员推荐指导下使用。

【实验结果/结论】

【仪器/耗材清单】试剂盒  PCR耗材