精确三维定位，实现EM成像——掌握精髓

使用简化的Coral Cryo电子断层扫描工作流程确保成功

低温电子断层扫描（CryoET）是一种成像技术，可以让研究人员以亚纳米分辨率观察蛋白质和其他大生物分子。了解分子的形状和结构，包括口袋和裂隙，可以帮助研究人员设计能够像拼图一样附着于分子的药物。低温ET成像也因此成为了解和治疗疾病和失调的重要基础。

了解徕卡显微系统的无缝冷冻电子断层扫描流程Coral Cryo如何使用共聚焦超分辨率更精确地定位您的意向结构。利用该工作流程，您可以可靠地快速部署实验，实现更好的可重复性、灵活性，并提高最终结果的准确性。

冷冻电子断层扫描(CryoET)
使用了冷冻电子断层扫描（Cryo TEM），将在细胞环境内观察生物分子的分辨率提升到了1nm，达到了前所未有的精度。通过这种方式，可以仅通过其形状来识别单个蛋白质，而且无需任何标记，甚至可以区分不同的构象，帮助深入理解分子社会学。

CryoET成像为理解空间蛋白质结构和相互作用提供了一种全新的方法，有助于解读细胞机制并应用这些见解。例如，它们可能有助于开发多种疾病的治疗方法。

但是，亚纳米分辨率的成像存在多种挑战：它的成本高昂，需要大量的培训，涉及许多仪器操作，而且大多数情况下，电子显微镜（EM）无法选择性地显示目标结构。为确保高成功率，在工作流程的光镜（LM）阶段，需要以尽可能高的分辨率识别和定位EM成像的目标体积。

徕卡显微系统的无缝低温电子断层扫描工作流程Coral使用共焦超分辨率进行精确定位。该工作流程不仅减少了样本制备的步骤，还提高了样本装载和转移的成功率，从而提高了On-Grid Lamella/CryoET工作流程的效率。

目标坐标以开放格式提供给后续的FIB研磨和LM-EM关联。因此，您可以实现更高的工作效率和更好的实验可再现性。这可以帮助您加速设施中的方案部署，并提高最终结果的准确性。

精确的三维体积定位
STELLARIS 5低温共聚焦显微镜，包括低温平台和转移梭，是Coral Cryo工作流程中精确定位的核心部分。与宽视场仪器相比，共焦显微镜的Z分辨率更高，在设计上更适合三维定位。

通过在后续的高精度关联中应用超分辨率的数据，STELLARIS 5 Cryo作为一个独立的组件，性能优于使用集成光镜进行定位的EM解决方案，同时也释放了宝贵的EM仪器时间。

使用荧光珠在样本上施加一个基准标记。通过确定它们在三维图像数据中的位置，可以显著提高Z轴上的定位精度。此外，徕卡还开发了一种基于插值的方法，能够以比系统的实际光学分辨率更高的精度找到荧光珠中心（正在申请专利）。

安全完成工作流程的各个阶段
STELLARIS 5 Cryo可结合先进的CryoET定位软件（LAS X Coral Cryo），还可以无缝集成和转移到低温FIB或VCT平台。传统的低温电子断层扫描的工作流程包含多个复杂的步骤，特别容易出错，并经常破坏后续重要的成像步骤。人工准备、处理和转移样本的步骤不仅麻烦、繁琐，还可能导致样本污染或反玻璃化。

Coral Cryo的工作流程改变了这一点。通过简化工作流程，可以实现更广泛的CryoET应用。精简的步骤、高灵活性和安全性，可确保样本的活力、质量检查，实现精确和可靠的三维定位机制。

低温平台是一个更稳定的封闭系统，更容易操作，且无需从平台上取下冷却插件。样本转移梭的装载过程简单，可将样本损失的风险降至最低，并促进沿仪器平台的转移。

STELLARIS 5 Cryo可结合先进的冷冻电子断层扫描定位软件 (LAS X Coral Cryo)，并与冷冻FIB或VCT阶段的各种无缝集成和传输选件结合使用。

集成解决方案的优势
如果没有准确的目标位置，片状目标区域的方法通常是一种耗时的迭代方法。与集成 LM-EM版本相比，使用Coral Cryo工作流程和STELLARIS 5 Cryo共聚焦显微镜可以通过共聚焦技术提供更高的分辨率，更好的图像质量和更高的Z分辨率。Coral Cryo为精确检测目标荧光提供了光谱灵活性，我们独特的TauSense技术可以消除不需要的自发荧光，并对目标识别进行微调，在进入EM阶段之前可以预先检查。

灵活性
Coral Cryo提供两种不同的工作流程解决方案，为低温FIB显微镜提供高灵活性。通过我们灵活的工作流程，我们的低温传输系统EMVCT可以连接市场上所有的低温FIB 解决方案，为您提供Coral Cryo工作流程的所有优势。对于Thermo Scientific Aquilos的用户，我们提供集成解决方案，通过将我们的样本盒与Aquilo低温FIB 的硬件整合，进一步减少工作流程的步骤。

精简的端到端Coral Cryo工作流程提供了明确的步骤、模块和无缝的硬件和软件接口。由于无缝的硬件和软件接口，Coral Cryo可以快速部署在您的设施或实验室。

荧光结构的三维定位用于冷冻电子断层扫描

 

通过超分辨率的低温共聚焦显微镜识别荧光结构。使用样本周围的珠子作为相关标记，可以在低温FIB-SEM上识别目标结构，并从细胞体积中磨出含有目标结构的薄片。薄片被转移到低温TEM上，记录薄片的倾斜系列。从倾斜系列中可以计算出三维体积，其分辨率可达亚纳米级，并为可视化和分析创建一个渲染图。

· A - 共聚焦三维体积的最大强度投影。目标结构（表达Ede1-eGFP的酵母细胞，参与凝集素介导的内吞作用）由一个箭头描述出来。

· B - FIB研磨后的TEM中的FIB片层，叠加Ede1-eGFP的荧光。

· C - 片层体积断层图的示例性图像。正方形表示图像D的位置。

· D-断层图的细节，描绘了相分离的内细胞蛋白沉积。

比例尺：A - 内部网格方块的宽度。90μm，条宽：35 µm.B, C, D - 插入物的边缘长度为2微米。