你问“沃”答 | 免疫组化技术专题第6期：染色显色

当免疫组化染色实验操作到了显色操作环节，说明之前环节的工作开展都比较顺畅，也因此我们就更不能在染色显色操作环节出现任何失误，否则可能前功尽弃；同时，显色液的污染还存在较大的健康安全隐患。本期就和大家一起交流染色显色液配置及相关注意事项。

  显色液配置顺序

• 在配置显色液之前，必须应严格按照说明书的配置顺序操作，一般的配制顺序是先加蒸馏水，然后加缓冲液，接着是底物H2O2，最后才添加 DAB 显色剂。

• 记得要校正蒸馏水pH浓度(pH=7.0)，以确保实验结果的准确性。若出现沉淀，要先进行过滤操作后才能使用。

• 同时注意现用现配，现配现用。配制好的溶液要避光存放，20 min内有效。另外配制顺序错误也会影响显色效果。

   控制显色时间

• 在做染色操作前，充分观察常规切片和HE染色情况，尽可能找出阳性内对照部位。显色时，一定要在显微镜下控制染色的深浅，以内对照部位出现稍浓于目的色的时间为该片的显色时间。

• 如果无阳性对照，可选择切片内的红细胞(RBC)为片内对照，一般红细胞（RBC）略微变色即可。

• 因为不同的抗体、组织、气温、水质等因素都会对显色带来影响，所以显色时间的控制尤为重要，同时具备阳性对照最 好。

• 显色时间可控制在5~15min。如果实验室室温较高，时间需要缩短；室温较低，则需要延长，但注意不能超过15min，不然容易导致背景上色。

   避免显色剂污染

DAB显色剂具有致癌隐患，这个问题必须重视，避免污染技术人员、其他人员、科室和实验室环境。

• 工具专用

因为DAB显色剂会污染，具有致癌隐患，所以配制过程中要注意污染隐患。但为了切实切断污染源头，显色操作所使用的器皿和显微镜要作为专用设备工具。在观察时DAB难免污染显微镜，特别是滴染显色常带着显色液观察，如不专用极易对他人造成污染，并且每次使用完毕的器皿和显微镜要擦洗干净和复位。

• 尽量避免显色液滴落

镜下控制显色程度时，尽量不要把显色液滴到台面及显微镜上，也不要溅到衣物和皮肤上。

• 同一地点操作

从显色液的配制到显色操作实验结束，整个操作过程均应在固定的环境和地点进行，如同一操作桌面上进行，这样可以使DAB显色剂的污染面积降到最小，清洗也容易，也不会有外滴风险。

• 实验废屑的处理

在显色操作过程中难免会有废屑产生，像一些擦拭纸等废弃物，需要定期用硫酸液中和处理后再集中丢弃处理，这也是为了避免污染他人。

【参考文献】

病理技术大讲堂1001问-病理技术操作疑难点解惑答疑. 席越，陈军主编.人民卫生出版社