皮肤单细胞测序难度较大？强强联手不在话下！

作为哺乳动物最大的器官，皮肤是动物与外界环境间最主要的物理屏障；由于生活习性和所处的外界环境不同，皮肤的功能和表面的微生物组成等都会发生变化。同时，皮肤又是独特的免疫器官，在维持稳态和抵抗各种病理条件时，发挥独特的免疫功能。皮肤组织内包含如朗格汉斯细胞、巨噬细胞、树突细胞等多种免疫细胞。在单细胞测序应用领域，研究者往往需要对皮肤组织内的不同细胞亚群进行分类，并在不同疾病模型下定位靶细胞，同时在进行肿瘤类研究时（如黑色素瘤和鳞状细胞癌等）也需要对肿瘤亚型及细胞的识别。

只有制备高质量的单细胞悬液才能保证下游实验的顺利进行，但是常规手工解离皮肤组织，不但费时，且获得的细胞悬液碎片高，产量低，同时还易结团，细胞活性差，严重影响下游研究的开展，如单细胞测序。因此在进行皮肤组织单细胞悬液制备时，需要更加简单快捷的方法，在提高实验效率同时，又能保证实验样本的质量。

瑞沃德单细胞悬液制备仪，通过组织处理管机械剪切，配合酶解试剂盒和内置的处理程序及温控系统，只需将样本放入，设好程序，即可轻松获得高质量皮肤单细胞悬液，获得的细胞可直接用于后续实验，如单细胞测序、原代细胞培养、细胞分选等。

有了高质量的单细胞悬液后，高效稳定且高性价比的单细胞测序平台将保障下游实验结果的质量与大规模应用的可能。达普生物Galaxy单细胞建库平台基于专利的微流控油包水单细胞包裹技术与微球编码配套技术，可快速实现 1-4 样本的单细胞测序文库构建。经过生信分析软件 StarScope处理后，表达矩阵结果兼容几乎所有下游生信分析软件，轻松得到单细胞测序实验数据。

下面为大家展示一下，瑞沃德单细胞悬液制备仪和达普生物单细胞建库平台无缝对接的样本制备与单细胞建库测序结果。

样本：小鼠耳部皮肤、背部皮肤。

制备方法：

1. 试剂准备

使用试剂盒中配套的Buffer将酶A、B、C分别充分溶解。

2. 样本准备

将剪下的小鼠背部皮肤置于冷PBS缓冲液中，用手术剪或手术刀的闭合圆边尖端分离皮肤样本后清洗3遍；耳部皮肤去除无毛部分，用镊子将背腹侧分开，用镊子轻轻刮耳朵内侧，去除残留软骨，然后将皮肤切成约1cm2的组织块。

图1.小鼠背部皮肤处理

图2.小鼠耳部皮肤处理

3. 程序处理

将组织块和酶mix放入组织处理管，安装加热套，运行加热程序 “M_Skin_Heater_1”。

 4. 单细胞悬液收集

程序运行结束后，用润湿后的40 μm细胞滤器过滤细胞悬液样本，50 mL离心管收集细胞悬液，500×g离心8min，彻底弃掉上清后，用适当缓冲液重悬后用于单细胞测序、流式细胞术或原代细胞培养等。

图3.耳部皮肤

图4.背部皮肤

达普生物先对上述悬液进行成像质检，并选取背部皮肤组织单细胞悬液，用其自主研发的Galaxy单细胞建库平台及配套的转录组试剂盒进行单细胞建库测序。

> 测序结果

1）达普StarScope软件分析结果：

2） UMAP聚类分析：

与发表文献对比，所有细胞类群能够mapping，比例高度相似，并且线粒体基因百分较低，证实利用达普Galaxy 对皮肤组织样本单细胞转录组测序的可行性及瑞沃德单细胞悬液制备仪解离的皮肤组织样本可直接对接达普Galaxy单细胞建库系统。

图5.UMAP图

图6.Reference：A Single Cell Transcriptomic Atlas Characterizes Aging Tissues in the Mouse

以上单细胞转录测序结果显示：通过瑞沃德自动单细胞悬液制备系统制备的皮肤组织样本可以直接用于达普Galaxy单细胞建库平台，不但缩短样本悬液制备时间，同时高质量的悬液质量，减少了单细胞建库过程中样本优化及减少一些碎片对反转录的影响，保证了建库质量，整体上缩减了整个单细胞建库测序周期， 验证了瑞沃德与达普Galaxy产品的高兼容性。 

瑞沃德单细胞悬液制备仪

1. 标准流程，提高实验可重复性。

2. 可配置加热套实现自动样品处理。

3. 多通道独立工作，可同步处理不同组织，节约实验时间。

4. 一机两用，同时可进行组织匀浆。

1. 性能优：可一次性完成数百至数万个细胞的分离，基因检测灵敏度高。

2. 上样活：1-4 通道，可灵活选择样本数及细胞数量，方便快捷。

3. 兼容好：文库兼容 主流国产与国外测序平台。

4. 分析全：自主开发的 StarScope 生信分析软件，可完成从原始数据到分析报告的生信分析。

5. 流程活：可接驳下游流程 ，如单液滴分选。

强强联合

   瑞沃德与达普生物在单细胞测序市场的业务上下游互补关系，瑞沃德在单细胞悬液制备领域沉积多年经验并组建了庞大的研发团队，推出了单细胞悬液制备仪及配套试剂盒， 其可快速对组织样本进行高质量的单细胞悬液制备，上市以来广受客户好评，有效解决了单细胞测序中的前端组织样本单细胞悬液制备难题，为单细胞测序建库提供前期保障，瑞沃德与达普生物双方强强联合，致力于打通单细胞测序上测序仪之前的各环节关卡，保证单细胞测序质量，共同深耕单细胞测序领域。

深圳市瑞沃德生命科技有限公司成立于 2002年，是一家专业服务于生命科学、动物健康以及临床医疗领域的国家高新技术企业，目前已搭建七大解决方案，涵盖动物手术与造模、神经信号研究、动物行为学研究、微循环监测与活体成像、组织与分子病理、细胞与分子生物研究和动物诊疗领域，可满足不同领域客户的专业化研究设备配置需求。目前，瑞沃德产品及服务覆盖海内外 100 多个国家和地区，已助力全/球700+医院，1000+科研院所，6000+高等院校，11000+宠物医疗机构取得成功，助力发表SCI文章14500+篇，赢得了数万家客户的信赖和支持。

达普生物孵化于香港科技大学，于2018年创立，是中国液滴微流控领军企业，致力于提供世界领/先的生命科学解决方案。公司在深圳、嘉兴、香港三地设有研发中心，研发团队近百人，聚焦于将液滴微流控技术应用于生物医药与精准医学领域，致力于成为集微流控芯片、仪器、试剂的研发和生产于一体的完整解决方案提供商。已商业化多款基于液滴微流控技术的科学仪器，包括单细胞高通量筛选系统（Comet High Throughput Sorting System）、星海单细胞测序建库系统（Galaxy Single Cell Analysis System）与星云数字PCR系统（Nebula dPCR System）， 可应用于抗体筛选、酶进化、合成生物学、高通量药物筛选、癌症研究、癌症早期筛查、靶向治疗、无创产前诊断和病毒定量、生物制品质检等领域。目前已服务超过100家国内头部生物医药、科研服务商与IVD企业，在业内获得广泛的认可。

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