污水中新型冠状病毒富集新选择

近期，美正生物推出智能水体微生物采集系统，并与行业标准WS/T799-2022《污水中新型冠状病毒富集浓缩和核酸检测方法标准》进行了实验过程和实验结果的比较。聚乙二醇沉淀法、铝盐混凝沉淀法富集浓缩实验，按照标准WS/T799-2022中试剂材料、操作步骤执行。美正生物智能水体微生物采集系统（以下简称“美正超滤法”）按照说明书执行。

材料与方法

材料：

智能水体微生物采集仪、高速冷冻离心机、生物安全柜、超滤浓缩管（0.01μm）、过滤袋、移液器及吸头、超滤浓缩管洗液、MS2过程控制试剂盒（RT－PCR探针法－50°C）。

方法：

预处理：取不同浑浊程度的污水样本，添加MS2混匀。样本进行4℃、5000g、30min或倒入过滤袋进行预处理，两方法均保留上清液，待用。

浓缩富集：

聚乙二醇沉淀法和铝盐混凝沉淀法按照标准WS/T799-2022进行富集浓缩，得到水样浓缩液，于0-4℃条件下保存，并于24h内进行核酸提取和荧光定量检测。

美正超滤法使用智能水体微生物采集系统用超滤浓缩管进行富集，富集后使用4mL超滤浓缩管洗液进行洗脱，得到水样浓缩液，于0-4℃条件下保存，并于24h内进行核酸提取和荧光定量检测。

实验过程

聚乙二醇沉淀法的实验步骤为预离心-二次离心-富集浓缩，需要使用高速冷冻离心机等昂贵设备，且多次离心、操作繁琐，样本处理时间为3.5-4h。铝盐混凝沉淀法的实验步骤为预离心-富集浓缩，实验准备时需要配置多种试剂，需要络合溶解，样本处理时间为2h。

美正超滤法实验步骤为预处理-浓缩-洗脱。高速离心、预处理2种方法均可满足前处理，且无需使用及配置大量试剂，样本处理时间为3-5min/100mL。综上，从操作便捷性及所需时间来看，美正超滤法显著优于聚乙二醇沉淀法、铝盐混凝沉淀法。

实验结果

✦注：数据来源于实验室，实际情况可能因样本或操作等情况导致不同。

聚乙二醇沉淀法取3份35mL污水样本，低浑浊回收率为5%±4%。铝盐混凝沉淀法取100mL样本污水样本，低浑浊回收率为16%±8%。美正方法取100mL样本污水样本，低浑浊回收率为70%±15%。

从表中可以看出，污水样本越浑浊，回收率越低，其中聚乙二醇沉淀法高浑浊污水样本回收率为ND。美正超滤法回收率显著优于聚乙二醇、铝盐混凝沉淀法。美正超滤法也可增大采样体积，进而提高检出率。

讨论

美正智能水体微生物采集系统可满足污水中新型冠状病毒富集浓缩。美正智能水体微生物采集仪可满足大体积样本的浓缩需求，随样本量体积的增加，可提高病毒阳性率的检出率。同时富集得到的病毒浓度大，更利于测序后续检测。

不同病毒富集方法回收率样本间差异大。可通过添加外源性内参，如噬菌体MS2、牛冠状病毒疫苗、灭活鼠肝炎病毒等，来评估病毒富集回收率。

部分浑浊度较高的污水样本提取后对反应体系有YZ，可能干扰PCR反应。建议同时对原液样本、10^-1稀释样本进行检测，根据实验室试验结果，10倍稀释样本可有效减少YZ干扰。对于回收率的计算方法，建议参照GB4789.42诺如病毒检验中外加扩增控制，进行计算。