逆转录酶（Reverse Transcriptase，简称RT酶）是一种能够将RNA模板转化为互补DNA（cDNA）的酶。在分子生物学研究中，逆转录酶的应用极为广泛，特别是在分子诊断领域发挥着不可或缺的作用。通过逆转录过程，可以将病毒的RNA基因组转换为cDNA，之后便可以利用如qPCR等技术对其进行扩增和检测。这一特性使得对诸如艾滋病、甲型流感以及乙型流感这类RNA病毒进行准确诊断成为可能。
图1. 逆转录流程示意图
追求更快速、更灵敏且操作更为简便的RT-qPCR分子诊断试剂已成为当前的主要发展趋势。作为RT-qPCR过程中的关键原料之一，逆转录酶需要具备更快的逆转录速度、更高的合成产量以及更好的耐热性能。为了获得更适用于RT-qPCR的逆转录酶，翌圣生物在M-MLV的基础上通过基因改造，开发出RNase H活性更低，热稳定性更高，持续合成能力更强的Hifair® 系列逆转录酶。
图2.逆转录酶作用原理图
翌圣Hifair®系列逆转录酶
目前翌圣有多种Hifair®系列逆转录酶，并且可提供各种剂型的产品，包含单酶、预混液，您可以根据实际需求进行选择。下表罗列了翌圣不同逆转录酶的特点和推荐应用。
表1.翌圣逆转录酶选择指南
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产品名称（货号） |
产品特点 |
推荐应用 |
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Hifair® III逆转录酶（11111ES） |
热稳定（高达65℃），适合复杂模板 |
RT-LAMP |
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Hifair® V逆转录酶（11300ES） |
兼容性强，速度快、合成产量高 |
一步法RT-PCR/qPCR |
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Hifair® Ultra逆转录酶（14604ES） |
持续合成能力强，合成长度可达20 kb |
RT-PCR/qPCR、RNA-seq、单细胞测序 |
注：以上所有的酶都有高浓度或无甘油版形式
下面重点介绍一款应用在RT-qPCR分子诊断试剂的逆转录酶：Hifair® V Reverse Transcriptase。该酶兼容性强，速度快、合成产量高，可耐受高达58℃的反应温度，非常适合用于RT-qPCR分子诊断试剂的开发。
Hifair® V逆转录酶性能展示
可耐受58℃反应温度，适合复杂RNA模板的逆转录
图3.将Hifair® V Reverse Transcriptase及进口品牌T*的逆转录酶分别在55℃及58℃下孵育30min检测残余酶活。结果显示Hifair® V Reverse Transcriptase在58℃下孵育30min仍能保持70%活性，远超进口品牌。
应用于RT-qPCR检出率优于其他品牌，检出范围：1 pg-1 μg
图4.以1 pg-1 μg（7个梯度）的293T细胞总RNA为模板，使用Hifair® V one-step RT-gDNA digestion SuperMix for qPCR(Cat#11142)、V*、T*进行逆转录，得到的cDNA进行qPCR定量分析。结果显示，11142ES灵敏度可达1 pg，检出率优于竞品。
翌圣逆转录酶突变体库
翌圣生物利用其ZymeEditor™双向分子酶理性设计与定向进化平台，持续推进逆转录酶的进化研究。至今，我们已经筛选出多种在不同应用场景下表现卓越的逆转录酶突变体，能够全面满足不同客户群体在多样化应用领域的需求。
表2.翌圣逆转录酶突变体选择指南
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产品类型 |
产品名称 |
货号 |
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高性能PCR单酶系列 |
10726ES |
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11300ES |
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10303ES |
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10603ES |
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10125ES |
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超洁净PCR单酶系列，超低宿主残留 |
Hieff UCF.ME® Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase (5 U/μL) |
14314ES |
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Hifair UCF.ME® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)
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14608ES |
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UCF.ME® Uracil DNA Glycosylase(UDG/UNG), heat-labile, 1 U/μL |
14466ES |
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14672ES |
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可冻干PCR单酶系列 |
Hieff UNICON® HotStart E-Taq DNA Polymerase, Glycerol-free (5U/μL) |
14316ES |
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11301ES |
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Uracil DNA Glycosylase(UDG),Heat-Labile(1 U/μL,Glycerol-Free) |
10707ES |
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10703ES |
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