上海富衡 | 富衡THP-1与U937成破骨细胞诱导试剂盒的全新上市！

破骨细胞（Osteoclast，OC）是骨吸收的主要功能细胞，在骨发育、生长、修复、重建中具有重要的作用。破骨细胞起源于血系单核－巨噬细胞系统，是一种特殊的终末分化细胞，它可由其单核前体细胞通过多种方式融合形成巨大的多核细胞。破骨细胞活性一旦异常，就会导致平衡被打破，从而引发骨硬化和骨质疏松等代谢性骨疾病。因此，破骨细胞的体外培养与研究对于临床疾病的研究非常重要。

抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase，TRAP）是破骨细胞的标志性酶，特异性分布于破骨细胞中。TRAP 染色试剂盒即是用于显示组织中的破骨细胞。其中基本原理在于，在含酒石酸的酸性条件下，抗酒石酸酸性磷酸酶 TRAP 能将萘酚 AS-BI 磷酸盐水解，产生的萘酚 AS-BI 与六偶氮副品红结合，形成非水溶性的酒红色物质沉积在酶活性原位，从而实现对抗酒石酸酸性磷酸酶的显色和定位。

01产品介绍

富衡生物THP-1与U937成破骨诱导分化试剂分为三个部分，分别是细胞、成破骨诱导液、 TRAP染色试剂盒。成破骨诱导液需先进行诱导成巨噬细胞，再进一步诱导成破骨。

成巨噬细胞诱导分化完全培养基液的配制方法

1. 配制前将成破骨诱导添加物 A 放置于室温（＞20℃）冰箱内完全融化。

2. 用 75%医用酒精擦拭消毒试剂盒中各瓶/管表面。

3. 取 50mL THP-1或U937完全培养基，然后将成破骨诱导添加物 A 全部加入 THP-1 或 U937 完全培养基中。

4. 轻轻颠倒摇晃配制好的成巨噬细胞诱导分化完全培养基，使其混合均匀。

成破骨诱导分化完全培养基液的配制方法

1. 配制前将试剂盒中的成破骨诱导添加物 B 和成破骨诱导添加物 C 放置于 4℃冰箱内完全融化。

2. 用 75%医用酒精擦拭消毒试剂盒中各瓶/管表面。

3. 取 100mL THP-1 或 U937 完全培养基，然后将成破骨诱导添加物 B 和成破骨诱导添加物 C 全部加入 THP-1 或 U937 完全培养基中。

4. 轻轻颠倒摇晃配制好的成破骨诱导分化完全培养基，使其混合均匀。

特别建议：如短时间内无法使用完全部的培养基，建议按照上述配方比例分批配制。剩余成分可以分装为合适的规格，按各自保存条件储存，切勿反复冻融。

02

成破骨诱导分化操作规程

分化流程（以 12 孔板为例）

1. 当 THP-1 细胞融合度达到 80-90%时，收集细胞并计数；

2. 使用 37℃预热的成巨噬细胞诱导分化培养基重悬细胞，按照 5×105~1×106 cells/孔密度进行铺板，每孔加入 1mL 成巨噬细胞诱导分化培养基。

3. 将细胞置于 37℃，5% CO2的培养箱中进行培养 48h。

4. 48h 换液，换成 37℃预热的成破骨诱导分化培养基，每孔 1mL。

5. 成破骨诱导培养过程中，每隔 1 天，吸去孔板中的诱导液，加入预热好的新鲜的成破骨诱导分化完全培养基；

6. 诱导分化 4-10 天，可观察到成熟的多核破骨细胞。

7. 诱导完成后即可进行染色或者下一步实验。

03

TRAP 染色

一、配制 TRAP 工作液

1. 取 50 μL 副品红溶液与 50 μL 亚硝酸钠溶液在洁净离心管中混匀，得到六偶氮副品红溶液；

2. 向第 1 步的 100 μL 六偶氮副品红溶液中加入 100 μL AS-BI 磷酸盐底物溶液，吹吸数次充分混匀。

3. 吸取 1.8 mL 反应缓冲液加入到第 2 步的混合液中充分混匀；

4. 第 3 步的混合液经针式滤器过滤（0.45 μm 水系滤膜）即得到 TRAP 工作液。

注意：务必按照所属顺序配制工作液。每个组织点大约需要 200-300 μL 工作液，根据使用量配制，现配现用，避免浪费。

二、染色操作

1. 细胞固定：吸除成破骨诱导培养基，加入 4%多聚甲醛室温固定 15~30 min，蒸馏水洗3 次。

2. 细胞破膜：（不做细胞核染色，可不做此步骤）以 0.2% Triton X-100 溶液覆盖细胞进行破膜处理 20~30 min，蒸馏水轻洗 3 遍。

3. 孵育染色：将 TRAP 工作液加到细胞孔板内覆盖细胞，37℃避光孵育 1~2h，蒸馏水洗 3 次。

4. 细胞核复染（可选，自备相关试剂）：吸除孵育液并水洗，以苏木素染液进行染核。

5. 显微镜下观察，拍照。