蛋白纯化系统的主要功能在于快速、高质量的蛋白质分离,它为灵活性和工艺可靠性提供了一种完整的解决方案。其主要应用在大子用于蛋白等生物大分子纯化及方法优化,可用于填料筛选方法优化和工艺放大,以及微克至数十克级别生物活性物质的分析和制备。
蛋白纯化系统主要利用三种基本原理进行分离纯化:分子筛层析、亲和层析和离子交换层析。分子筛层析的原理是利用凝胶的分子筛性质,通过柱层析方法将相对分子质量不同的蛋白质分离;亲和层析则利用亲和能力不同,将与配基特异性结合的蛋白质吸附固定在层析柱中,再通过改变缓冲液的离子强度和pH 值或者更强的配体结合溶液将结合的蛋白质洗脱下来;离子交换层析则是根据样品表面电荷不同进行分离纯化的技术,适合任何带电生物分子的初步纯化,可除去杂质并提纯。
高效液相层析是一种常用的分离和分析方法,其原理是流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被载入色谱柱内,由于各组分在两相中具有不同的分配系数,经过多次吸附-解吸的分配过程后,各组分在移动速度上产生较大的差别。高效液相色谱适用于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质,因此成为蛋白质等生物大分子纯化的重要手段。
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