知新势 应新变｜ZX2021 CLSI M100 要点更新细数（上篇）

受到新冠疫情的影响，今年的CLSI M100更新姗姗来迟。而今年又有哪些重要更新，接下来让我们一起来了解一下。

01 全彩正文，关键信息更明确

翻开CLSI正文，DY感觉就是所有表格变成了全彩，凸显了关键信息。

如所有表头、标题、各种分割等全部变成了彩色，关键信息更加突出。

02 血培养报阳后直接纸片扩散法检测

虽然 2019年EUCAST推出了血培养报阳快速药敏检测 —— RAST实验，但是EUCAST药敏体系本身和CLSI存在一定差异，如结果解释、折点包括纸片含量等均与CLSI不同，妨碍了此方法的推广和使用。今年 CLSI就此增加了相关内容，为加速血培养报告，缩短药敏报告TAT，提供了一个相对可靠、标准的方法。

目前此方法仅适用于肠杆菌目细菌，适用药物也只有氨苄西林、氨曲南、头孢他啶、头孢曲松、妥布霉素和FF磺胺 6种，和EUCAST RAST比较，测试的菌株种类和药物数量都比较少，同时缺少ZL血流感染非常关键的碳青霉烯类药物。

具体的操作流程如下

1.对于革兰染色为阴性的血培养瓶，取报阳8小时以内的血瓶，上下颠倒5-10次充分混匀；将血培养瓶盖消毒，并插上 20G（国内标准为7#） 排气针，向MH琼脂 滴加4滴 血培养报阳后肉汤，涂布均匀（参考 KB法 MH琼脂的涂布方式）；同时需要接种血平板 进行纯培养，确认其纯度。

2.涂布完成后将其半开盖 3-5分钟（不要超过 15分钟），贴上抗生素的纸片。

3.在15分钟内放孵育箱倒置进行孵育。

CLSI建议 16-18小时后，按照CLSI M02 的要求量取YJ圈直径，并使用 M100 中的表格2A中的折点进行解释报告，CLSI 目前尚未完成对于短时间（如8-10小时）读取YJ圈准确性和折点的评估。

检测结果

如果生长出现异常（如，混合接种、非融合生长、生长微弱导致无法读取），不要解读直接纸片扩散法的YJ圈直径和结果解释，而需要直接报告纯培养后执行的标准药敏的操作。

如果发现双重YJ环，或YJ圈内存在菌落，首先需要检查纯度平板，确认纯度。

如果为纯培养则读取内圈。

质控方面和 EUCAST不同，对于直接纸片扩散法测试，CLSI没有提出一套完整的质控流程，仍然沿用现有的质控方法。CLSI建议使用大肠埃希菌 ATCC 25922 按照 M02的要求进行质控。后续会有更为详细的CLSI 血培养阳性快速药敏的方法细节解读，并就CLSI和EUCAST 2种快速药敏方法的差异进行对比，供大家参考。

虽然从目前来看CLSI 对于血培养阳性快速药敏还存在诸如使用范围较窄、药物种类偏少、不支持快速药敏读取等问题，但是至少规范了血培养报阳以后如何进行KB法药敏测试的操作方法。随着评估工作的进一步深入和发展，此方法的适用范围、快速结果判断等内容也会陆续更新。

而在实际工作中，VITEK 2的药敏检测在8-12小时内。如果实验室可以合理规划药敏检测的时间，结合ZG卡覆盖药物的优势，同样可以向临床提供快速药敏服务。

03 折点相关更新

a) 葡萄球菌苯唑西林

自从2016年以来，几乎每年都会对葡萄球菌耐甲氧西林（苯唑西林）的折点进行更新（见下表所列），今年也不例外:

如下图总结，今年金黄色葡萄球菌和路登葡萄球菌以外的葡萄球菌属的苯唑西林 MIC折点进行了更新，向上增加了1个对倍稀释度，敏感折点从0.25µg/mL 上调至0.5 µg/mL。并且对而后的注释进行了相应的调整。但是头孢西丁纸片法的折点没有变更。

目前CLSI中对于葡萄球菌耐甲氧西林的检测非常复杂，目前有5种表型检测方法：头孢西丁MIC法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林MIC法、苯唑西林纸片扩散法以及苯唑西林盐琼脂法。同时不同的葡萄球菌所使用的表型检测方法也有很大的差异，见下表：

这样造成了表格非常臃肿，就葡萄球菌而言，仅苯唑西林的折点表格就有3页。为此新版CLSI 重新总结了葡萄球菌耐甲氧西林的检测表格，将1张大表分为2张小表，表格3G-1针对金黄色葡萄球菌和路登葡萄球菌，可用头孢西丁MIC法和头孢西丁纸片扩散法；苯唑西林MIC法 和苯唑西林盐琼脂法4种表型测试方法；表格 3G-2 针对金黄色葡萄球菌和路登葡萄球菌以外的葡萄球菌，可用头孢西林纸片法，苯唑西林纸片法和MIC法来进行检测。

目前 VITEK 2 对于葡萄球菌的耐甲氧西林的检测，使用头孢西丁筛选实验（等效于头孢西丁纸片扩散法）和苯唑西林MIC相结合的方法；而对于金黄色葡萄球菌和路登葡萄球菌以外的葡萄球菌是否需要调整苯唑西林MIC折点，还有待进一步的研究。

b) 阿奇霉素对于志贺菌折点，以及对于淋病奈瑟菌的纸片法折点  

目前肠沙门伤寒血清型和志贺菌对于阿奇霉素有了相关折点，但CLSI 也增加了相关的注释，对于志贺菌，特别是宋内氏志贺菌纸片法YJ圈可能会模糊，难以测量。如YJ圈难以测量，建议使用MIC法。

对于淋病奈瑟，增加了阿奇霉素的纸片法折点。

c) Lefamulin和亚胺培南-瑞莱巴坦的折点

Lefamulin是2019年FDA批准的半合成截短侧耳素类抗生素，通过通过与细菌核糖体的胎基转移酶ZX相结合，从而YZ细菌生长所需蛋白质的合成途径发挥KJ作用。主要用于ZL社区获得性肺炎，KJ谱包括肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌（甲氧西林耐药菌株）、流感嗜血杆菌、嗜肺军团菌、肺炎支原体和衣原体等。目前 CLSI新增了Lefamulin针对葡萄球菌；肺炎链球菌和嗜血杆菌的折点。此外截短侧耳素类是一个具有全新KJ机制的新抗生素大类，其化学结构和现有KJ药物有很大差异，可以对β-内酰胺类，大环内酯类、喹诺酮类、四环素类药物耐药株同样具有KJ活性。目前针对这些细菌仅有敏感折点，没有中介和耐药折点。

而亚胺培南-瑞莱巴坦是针对CRE的新药，瑞莱巴坦是一种新的β内酰胺酶YZ剂，与阿维巴坦较为类似，可以YZ丝氨酸酶，但是对于金属酶没有活性。目前也在国内进行相关的临床实验，有望在几年内推出。

今年CLSI增加了亚胺培南-瑞莱巴坦对于肠杆菌目、铜绿假单胞菌和厌氧菌的折点，并且在备注中强调，亚胺培南敏感可以推导亚胺培南-瑞莱巴坦敏感，但是亚胺培南-瑞莱巴坦敏感不能推导亚胺培南敏感。

d) 其他折点相关更新

流感嗜血杆菌增加了头孢洛扎-他唑巴坦的敏感折点（仅MIC法≤0.5/4为敏感）。