你问“沃”答 | 冷冻切片有哪些常见问题？对应的原因及解决方法是什么？

在冷冻切片的过程中，你是否也遇到：

切片有划痕

切片厚度不均

组织黏在防卷板上……

想要制作一张高质量的组织切片，不仅需要长期的反复练习，更需要借鉴前人的经验。本期我们将从大家实际冷冻切片中遇见的问题着手，查找原因并给出对应的解决办法。

问题01：箱体结霜

原因：

1、切片机窗户打开时间过长；

2、机器自身温控性能差。

解决方案：

1、不使用机器时注意关好玻璃窗；

2、做除霜处理；

3、瑞沃德冷冻切片机制冷和温控性能可以有效避免结霜问题，同时可设置自动除霜和手动除霜。

问题02：切片发黏

原因：

组织、刀片、防卷板都可能温度过高，导致片子回温湿润。

解决方案：

1、当机器到达设定温度后，再制冷一段时间再切片，保证箱体内部硬件冻透；

2、适当延长样本冷冻时间或者把样本放在速冻台快速冷冻位点制冷。

问题03：切片开裂，不能正常展开

原因：

1、组织过冻，脆性增加；

2、刀片或防卷板上有碎屑或者有细微缺口；

3、组织包埋不规则，有细微隆起。

解决方案：

1、调高样本头温度，适当缩短组织冷冻时间；

2、清理防卷板和刀片处，或更换刀片和防卷板玻璃面；

3、再次修片，修出平整截面再切片或重新包埋。

问题04：片子在防卷板上卷曲（进不了防卷板）

原因：

防卷板与刀片边沿距离不合适。

解决方案：

调整防卷板，使其细微向前移一些。

问题05：样品剐蹭到防卷板

原因：

防卷板与刀片边沿距离不合适。

解决方案：

调整防卷板，使其细微向前移一些。

问题06：片子有划痕

原因：

1、刀片有缺口；

2、防卷板有缺口。

解决方案：

1、更换刀片或者侧向位移换新的刀口；

2、更换防卷板玻璃面或侧向位移换新的防卷板区域。

问题07：切片震颤或有杂音

原因：

1、组织与样本托之间未冷凝稳固；

2、刀片、刀架和样本头未锁紧；

3、组织过硬且包埋不规则。

解决方案：

1、重新用包埋剂将组织与样品托包埋冷冻；

2、检查刀片、刀架和样本头是否锁紧；

3、增加切片厚度。

问题08：切片厚度不均

原因：

1、刀架角度不合适，刀片背面有碎屑或结冰，切片速度不一致；

2、刀片和样品头未锁紧；刀架未锁紧。

解决方案：

1、通过调整刀架间隙角（出厂默认是5°）从而调整刀片角度，清理刀片锁紧位置和更换刀片，调整切片速度；

2、检查刀片、刀架和样本头是否锁紧。

问题09：组织粘在防卷板上

原因：

1、防卷板温度过高或位置不合适；

2、防卷板带静电；

3、脂肪等组织粘在防卷板边沿。

解决方案：

1、切片前，防卷板先冷冻一下或调整防卷板位置；

2、更换防卷板玻璃另一侧试试效果；

3、清理防卷板边沿再切片。

问题10：防卷板抬起后，片子卷曲

原因：

1、防卷板温度过高；

2、包埋剂包埋不均匀。

解决方案：

1、切片前，防卷板先冷冻一下；

2、组织包埋的厚度和形状尽量规则，再用毛笔辅助展片。

问题11：载玻片无法贴片

原因：

载玻片温度偏低。

解决方案：

1、载玻片温度升高后再贴片；

2、载玻片贴片前放置于箱体外部。