不藏了！师兄做转染总是一把过，原因竟是……

选择合适的细胞系：根据实验目的和需求，选择适合的细胞系进行转染，不同细胞系对给定的转染试剂或方法反应各异。

确保细胞健康与活性：转染前细胞活性和整体健康状态是影响转染结果的重要因素，应至少有 90% 的细胞为活细胞，传代复苏时间应足够，一般推荐在转染前至少 24 小时传代细胞。

控制细胞汇合度：转染时细胞的最佳密度取决于细胞类型和转染技术，应根据转染细胞系确定最佳密度，确保细胞在转染时未达到完全汇合或处于静止期。

选择合适的培养基：根据细胞类型和转染方法选择最适合的培养基，使用新鲜的培养基，某些细胞系或原代细胞可能需要特殊的包被材料贴附培养板。

注意 siRNA 质量、储存和用量：siRNA 须不含合成试剂残留，避免反复冻融和污染，其最佳用量受靶基因产物性质的影响，需要针对每种细胞系优化。

选择合适的转染方法和试剂：根据想要输送的载体（DNA、RNA 或蛋白质）以及要转染的细胞类型选择合适的转染方法，如阳离子脂质体介导的转染、磷酸钙共沉淀、电穿孔等，并选择合适的转染试剂，如 Lipofectamine 3000、Lipofectamine 2000 等。

优化转染条件：

● 磷酸钙 - DNA 共沉淀法：优化 DNA 的用量、细胞与共沉淀一同孵育的时间以及甘油或 DMSO 休克的使用和持续时间。

● 阳离子脂质体转染：优化 DNA 用量、转染试剂与 DNA 的比例、脂质 - DNA 复合物的孵育时间以及加入复合物时的细胞密度。

● 电穿孔法：优化脉冲电压、脉冲宽度和脉冲数量等电参数。

控制细胞在转染试剂 /siRNA 复合物中的暴露时长：敏感细胞暴露在转染试剂中几个小时后即开始死亡，若转染会引起过多细胞死亡，应在 8～24 小时后去除转染混合物，补充新鲜培养基。

避免使用抗生素：在平板接种过程中以及转染后 72 小时内，避免使用抗生素，因为抗生素会在透化处理的细胞中积聚产生毒性。

使用优化的试剂转染 siRNA：选择专用的转染试剂来导入小 RNA，根据细胞类型使用优化的 siRNA 转染试剂和实验方案。

优化转染试剂的体积：转染试剂的体积是一个重要的优化参数，体积过少会限制转染，过多则会引起毒性，最终转染效率受与 siRNA 结合的转染试剂量的影响。

优化血清使用：一般而言，培养基中加入血清会促进 DNA 的转染，但在进行阳离子脂质体介导的转染时，需在无血清的情况下形成 DNA - 脂质体复合物，转染 RNA 时建议在无血清的情况下进行，以避免 RNA 酶污染。同时要控制不同品牌甚至不同批次血清的差异性。