常见促细胞贴壁物质和包被方法！

大部分来自实体组织器官的细胞都会贴壁，但不是所有的细胞在体外培养的情况下都会贴壁。许多细胞必须添加促贴壁物质才能贴壁生长，促贴壁物质一般为细胞外基质，如纤连蛋白、层粘连蛋白、玻连蛋白和胶原蛋白等。

二者大多数均为糖蛋白，因此具有较强的亲水性。因此细胞贴壁与否和细胞本身分泌细胞外基质的能力以及细胞本身表达的黏附分子的数量有关，也与有无合适的底物（培养瓶）有关。大多数的哺乳动物细胞在体内和体外均附着于一定的底物而生长，在体外时这些底物可以是其他细胞、胶原、玻璃或塑料等。

胶原蛋白是支持细胞和组织生长的重要胞外基质蛋白，其形成的胞外环境有利于多种细胞的粘附、生长、迁移和分化。胶原主要包括I型胶原，Ⅱ型胶原，Ⅲ型胶原，Ⅳ型胶原，Ⅴ型胶原，Ⅵ型胶原几种。

I 型胶原—最常见的胶原蛋白，促进细胞的贴壁和增殖，用于内皮细胞，肝细胞，肌细胞等的培养。

软骨细胞对II型胶原的黏附性较好；上皮细胞在Ⅳ型胶原底物上贴壁良好，而在I、II、III型胶原底物的培养板上贴壁情况较差。胶原应用及建议细胞基质浓度。

表1.不同胶原蛋白包被浓度

细胞纤连蛋白（fibronectin，FN）是一种细胞外糖蛋白，分别以可溶形式存在于体液中，或以不可溶形式存在于细胞外基质中。作为主要的细胞粘附分子之一，FN 在许多重要的生理过程中起着关键性作用，如胚胎生成，伤口愈合，止血和血 栓形成。纤连蛋白表达的改变，降解以及组合与大量的病理发生密切相关，包括癌症和纤维化。

重组纤维连接蛋白，可作为一种细胞培养基质，替换Matrigel、鼠尾胶原、血源纤连蛋白等，提高细胞贴壁率，增强细胞代谢水平，缩短细胞生长周期。也可直接添加到培养基中，替换或降低血清使用量，促进细胞贴壁、迁移、移动生长、维持细胞状态。

Human FN包被方法（以6孔板为例）

【注】：包被/铺板实验中，重组人纤维连接蛋白（rFN）工作液的加入量，应根据培养皿/瓶的大小进行调整，请参见下表2。

表2. 重组人纤维连接蛋白包被浓度

玻连蛋白（Vitronectin），又称S-蛋白或血清扩散因子，是一种在肝脏中合成的分泌型糖蛋白，属于小分子蛋白，借由Vitronectin 受体让细胞贴附于细胞基质中，主要促进细胞迁移，增加细胞贴附性、细胞分裂、细胞生长分化等，并协助细胞间的讯号传递。

Human VTN蛋白包被方法

本方案仅作参考，具体包被条件需要根据细胞培养体系进行优化

【注】：VTN的工作浓度与不同细胞系密切相关，请根据不同细胞系对VTN包被浓度进行适当调整。避免使用在4℃保存24小时以上的、配制好的VTN包被液进行包被。

表3. Human VTN 包被不同培养器皿的建议使用体积

层粘连蛋白是细胞外基质的重要组成，存在于所有上皮细胞和内皮细胞的基底侧，同时也是某些细胞与细胞间交互作用的中间媒介。层粘连蛋白对于生物活性至关重要，影响细胞分化、生长、迁移和粘附等。层粘连蛋白是一种细胞外基质多结构域三聚糖蛋白，是基底层的主要非胶原成分，支持粘附、增殖和分化。层粘连蛋白由A、B1和B2链组成，这些链由许多二硫键连接。层粘连蛋白支持多种细胞类型的生长和分化，包括上皮细胞、内皮细胞、神经细胞、肌肉细胞和肝细胞。Laminin 521已成为大规模扩增诱导多能干细胞 (iPSC) 最有前景的涂层系统。

Laminin 521一般使用步骤（仅供参考）：

Poly-lysine多聚赖氨酸，是一种带正电荷的氨基酸聚合物，包被在培养器皿表面，不仅能促进细胞的贴壁，还能加强对血清蛋白和细胞外基质蛋白的吸附，也可用作组织学分析的粘片剂。多聚赖氨酸分为D型和 L型。

Poly-D-lysine多聚-D-赖氨酸（PDL）和Poly-L-lysine多聚-L-赖氨酸（PLL）分子量为150000~300000，都可促进细胞的贴壁生长，最常用的浓度是0.1 mg/mL。2个产品的区别在于PDL不会被细胞吸收，但PLL可以被某些细胞吸收，摄入过多会产生一定的细胞毒性。

细胞培养一般步骤如下：