氯仿是Trizol试剂提取提取RNA的必需品。由于氯仿为易制毒类化学品，在订购、使用和储存等方面有很多的法律法规要求和限制。2019年7月23日，氯仿被纳入生态环境部国家卫生健康委员会发布的《有毒有害水污染物名录(第一批)》；2023年3月1日，氯仿又被纳入《重点管控新污染物清单(2023年版)》。氯仿有很强的麻醉作用，主要作用于中枢神经系统，造成肝，肾损害，已被流行病学证实为动物致癌物质，危害很大。氯仿即属于有毒试剂，又属于管制试剂，采购受到限制。怎么办呢？

Trizol试剂可以直接从组织或细胞中提取总RNA，该试剂的成分为异硫氰酸胍、酚、8-羟基喹啉和β-巯基乙醇。在样品裂解或匀浆的过程中，trizol试剂能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出来的核酸酶且保持RNA的完整性。加入氯仿离心后，样品分为水相层和有机相层，RNA存在于水相层中，在酸性条件下总RNA保留在上层水相中。而大部分DNA和蛋白质保留在中间相或下层有机相中。收集上述水样层后，可通过异丙醇沉淀来回收RNA。此外，样品中的DNA和蛋白也能以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，而在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。

Trizol    氯仿   异丙醇   乙醇   离心管 RNase-Free水  枪头

RNA Extraction buffer RNA提取辅助试剂

采用TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent 10606ES提取10 mg鱼肝样本，实验组加入0.2 mL RNA Extraction buffer（Cat#19203ES），对照组加入0.2 mL氯仿，提取的RNA采用Nanodrop检测RNA的浓度和纯度，取5 μL进行琼脂糖凝胶电泳。结果如图所示，翌圣无氯仿提取后的RNA，含量高，纯度好，完整性指数高。

图1.提取的RNA浓度、纯度和琼脂糖凝胶电泳图