微滴芯片数字PCR技术检测新冠病毒的应用

国家卫健委发布了《新型冠状病毒肺炎防控方案（第五版）》，其中在实验室检测技术指南中明确提出，核酸检测结果阴性不能排除新型冠状病毒感染。3月4日，国家卫健委发布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》 中提到了以下两点：对疑似病例要尽可能采取包括快速抗原检测和多重PCR核酸检测等方法对呼吸道病原体进行检测。在传播途径中提到：“在相对封闭的环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况下存在传播的可能”。

目前检测困难：

从感染到治愈，至少需3次使用PCR检测：疑似筛查、确诊、治愈。针对2019-nCoV病毒的检测相关技术已成为应对疫情的紧急。

在《中华医学杂志》2020年2月11日刊登的《新型冠状病毒肺炎病毒核酸检测专家共识》在判断条件中提出：“当报告为"可疑"时，实验室应考虑以下措施：（1）更换不同厂家的试剂盒重复实验或采用敏感度更高的方法，如数字PCR方法进一步确定；（2）建议临床重新采集标本或更换部位采集标本再次检测。”

Naica微滴芯片式数字PCR针对新冠病毒检测解决方案

（仅供科研使用）

基于Naica自动化微滴芯片式数字PCR系统和三通道探针法新冠病毒检测试剂盒，高特异性，高灵敏度且全封闭过程确保安全性。

通过一步法反转录-数字PCR-探针方法，只需加入RNA模板，即可实现高特异性、高灵敏度、全封闭的新冠病毒RNA定性检测和定量。在一个样本管中同时检测新冠病毒的开放读码框1ab（ORF1ab）、核壳蛋白（N）基因区域和人内源质控基因。

新型冠状病毒2019-nCoV一步法核酸检测试剂盒（数字PCR法）

应用

1、用于有接触史尚无症状者排查，检测病毒携带状况；

2、 用于荧光PCR的Ct值在37-40之间的可疑样本的核酸极ng准检测。

3、 用于新型冠状病毒感染患者病毒载量动态观察：基于数字PCR的定量能力，提供更为准确的病原体载量。

4、可用于治愈后患者体内病原体核酸检测。

5、 标准参考物质的制备：数字PCR是制备标准参考物质定量的重要方法，为荧光PCR试剂盒提供可靠的标准物质。

优势

1、采用创新的一步法逆转录数字PCR检测试剂盒，可将逆转录及数字PCR扩增整合到一个反应，实现单反应三重的检测，可同时检测2019-nCoV新冠病毒两个靶基因和人源内参基因，监控上样同时也消除病毒变异带来的风险。

2、试剂盒里含有阴性质控样本和阳性质控样本，可以对实验过程和核酸样本进行质控。

3、能够从大量背景和干扰信号中检测到病原体核酸，检测灵敏度较普通荧光PCR可提高1-2个数量级，Zdi检测可实现单拷贝检测。

4、可搭配Naica微滴芯片数字PCR使用，独立反应芯片设计，不易产生交叉污染，也避免了气溶胶的污染。

5、操作简易，核酸提取完成后只需要一步加样就可完成所有人为操作，其他操作由仪器自动来完成。

6、检测迅速，核酸提取完成后，检测流程约2.5h即可完成。

7、根据《新型冠状病毒感染的肺炎实验检测技术指南（第二版）》，本指南中的核酸检测方法主要针对新型冠状病毒基因组中开放读码框1a/b（open reading frame 1ab，ORF1ab）、核壳蛋白（nucleocapsid protein，N），同时增加人源内参基因的检测。