如何测定蛋白浓度

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【导读】考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋白质浓度1、试剂：（1）考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G250100mg溶于50ml95%乙醇，加入100ml85%H3PO4，用蒸馏水稀释至1...

考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋白质浓度

1、试剂：

（1）考马斯亮蓝试剂：
考马斯亮蓝G250100mg溶于50ml95%乙醇，加入100ml85%H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。Z终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G250,4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。

（2）标准蛋白质溶液：
纯的牛血清血蛋白，根据其纯度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。

2.器材：（1）可见光分光光度计（2）旋涡混合器

3、标准曲线的制作
试管编号0123456
100ug/ml标准蛋白（ml）0.00.10.20.30.40.50.6
0.15mol/LNaCl（ml）10.90.80.70.60.50.4
考马斯亮蓝试剂（ml）5555555
摇匀，1h内以0号管为空白对照,在595nm处比色
A595nm
以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20ug、30ug、40ug、50ug、60ug），在坐标轴上绘制标准曲线。
4、样品中蛋白质含量的测定

另取两支干净的试管（做一重复），加入合适浓度的待测样品，使其测定值在标准曲线的范围内，测定方法同上，由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。
注意事项：
1、如果要求严格，Z好在试剂加入后的5~20min内测定光吸收，因为这段时间内颜色是Z稳定的。

2、若选择在旋涡混合器上混合，注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除。
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2004-11-06 09:23:09

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