ELISA实验中常见问题及原因分析

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【导读】上海恒远销售部、技术部根据客户的咨询，将最新的常见问题以及原因分析整理出来以供大家参考：（一）ELSIA实验中结果颜色浅、灵敏度偏低的原因试剂盒在运输、保存期间放置的温度过高，时间...

上海恒远销售部、技术部根据客户的咨询，将Zxin的常见问题以及原因分析整理出来以供大家参考：

（一）ELSIA实验中结果颜色浅、灵敏度偏低的原因

试剂盒在运输、保存期间放置的温度过高，时间过长，造成抗原、抗体效价下降，酶的活力降低。试剂盒已经超出保存的有效期，抗原抗体效价下降，酶的活性降低。移液取样不足，移液时抽吸、排放太快，移液嘴内壁挂液太多或者内壁不清洁。造成加样量不足。孵育温度偏低，或多块反应板重叠放置造成孔内的实际温度偏低，使抗原、抗体复合物形成过少。保温时间不足，抗原、抗体反应不完全。显色剂加入量不足。显色液A,B比例不对。洗涤时冲击力过大，洗涤液浸泡时间太长，洗涤次数增加，导致已经形成的抗原、抗体复合物洗脱。底物反应的温度不够、时间不足。

（二）ELSIA实验中结果出现白板、阳性对照不显示的原因

洗涤液配制有误。终止液误作为浓缩洗涤液或者酶结合物稀释使用。漏加酶结合物，误加酶结合物或者酶标二抗的实验顺序错误。终止液当作缓冲溶液使用。配制溶液中残留了灭活酶活力的物质。底物液未加入OPD或者TMB.运输、存储不当、导致酶活力丧失。底物液中未加入过氧化氢或放置过久过氧化氢失效。

（三）ELSIA实验中结果全部显色的原因

酶结合物的浓度过大。孵育温度偏高，底物显色时间过长。洗涤不充分，样品有其他成分残留或者酶结合物残留。底物配制时间过久，底物受光照射时间较长或污染。整批样品放置时间过长被污染或生长细菌。移液嘴重复使用时，未清洗干净或者消毒不彻底。配制溶液的水质有问题。

（四）ELSIA实验中结果阴性、阳性对照显色差距较小的原因

稀释不准、加样量不准。加样时各孔均被污染。底物不新鲜，配制时间过长或被污染。试剂效价下降或超过了试剂的有效使用期。配制溶液的水质有问题。

（五）ELSIA实验结果重复性不好的原因

样品加入量多少不一，加样时间又长有短。样品加入后未充分混合均匀。移液加样器加样量不一致。酶标仪滤光片不对。操作过程中个别反应孔中液体外溅。不同批号试剂混用。瓶盖交叉使用。孵育条件和保温时间不一致。显色时间和条件不一致边缘效益，导致周边孔（尤其是四个角）较ZY孔显色深。将酶结合物或底物溶液加在孔壁上，并有残留。酶结合物未充分混匀就加入反应孔中。洗涤条件不一致。多加或少加了酶标记物、底物。

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2004-11-29 09:23:22

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