MolPure® Magnetic FFPE DNA Kit磁珠法石蜡包埋组织DNA提取试剂盒（瓶装）V2

产品简介 

MolPure® Magnetic FFPE DNA Kit适用于从福尔马林固定石蜡包埋组织（FFPE）中分离纯化出高质量的DNA。本试剂盒使用非二甲苯脱蜡液，安全、简单、快速地提取基因组DNA，提取产物适用于各种下游应用实验，如 qPCR 和二代测序等。本产品可配合磁珠法自动化提取仪使用，实现核酸的高通量提取。

产品信息

组分信息

注意：使用前洗涤液A（18375-F）每瓶需加入27 mL无水乙醇，洗涤液C（18375-H）每瓶需加入72 mL无水乙醇。

储存条件

1.PartⅠ室温运输，4℃保存，有效期12个月；

2.PartⅡ室温运输，室温避光保存，有效期12个月。

实验前准备

1. 第一次使用前应按试剂瓶标签说明在洗涤液A和洗涤液C中加入无水乙醇 ，充分混匀后使用，并在标签的方框中打勾做好“乙醇已加”的标记。
2. 实验开始前将水浴锅或金属浴预热至60℃。
3. 使用前请检查脱蜡液、裂解液和结合液是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请于56℃水浴重新溶解。

操作方法

一、样本前处理

1. 用手术刀切除石蜡组织标本上多余的石蜡，将组织块切成5～10 μm的薄片。

注意：如果组织表面暴露在空气中，须丢弃开始的2-3片组织切片。

2. 收集1～8片组织切片装入一个1.5 mL离心管中，加入300 μL脱蜡液，60℃ 孵育6 min，立即涡旋 20 s让石蜡充分溶解。
3. 依次加入225 μL裂解液，20 μL蛋白酶K溶液，涡旋振荡10 s，12000 rpm，25℃离心1 min。

注意：a. 如果样品量多可增加脱蜡液至500 μL。

b. 脱蜡液低于18℃会凝固，如果凝固请于56℃水浴锅加热复溶。

4. 60℃孵育1 h（期间可以旋涡振荡数次帮助组织溶解）。

5. 90℃水浴1 h（60℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或金属浴温度达到90℃后再把样品置于90℃孵育）。

6. 12,000 rpm离心1 min，使用 200 μL 枪头沿管壁小心吸取下层水相200 μL到新的1.5 mL离心管中。

7. （选做）若残留 RNA 对后续实验有影响，可加入 5 μL RNase A 溶液(100 mg/mL)（自备，Yeasen Cat No.10406），振荡混匀，室温放置 5-10 min。

8. 加入20 μL 蛋白酶K溶液，涡旋混匀10 s，短暂离心后于65℃孵育15 min。

9. 短暂离心后即得到待用样本混合液。

二、手动提取步骤

1. 向上述待用样本混合液加入300 μL结合液，350 μL异丙醇，涡旋混匀。

2. 加入20 μL磁珠悬浮液，涡旋混匀，置于旋转混匀仪上孵育10 min。

注意：磁珠悬浮液使用前需充分涡旋混匀，保证磁珠彻底重悬，每加样几次后需充分摇匀后继续加样。

3. 短暂离心后，将离心管置于磁力架上静置，待磁珠完全吸附，小心吸弃液体。
4. 加入700 μL 洗涤液A（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），涡旋混匀2 min，确保磁珠分散。
5. 短暂离心后，将离心管置于磁力架上静置，待磁珠完全吸附，小心吸弃液体。
6. 加入400 μL 洗涤液B，涡旋混匀1 min，室温静置3 min。
7. 短暂离心后，将离心管置于磁力架上静置，待磁珠完全吸附，小心吸弃液体。
8. 加入700 μL 洗涤液C（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），涡旋混匀2 min，确保磁珠分散。
9. 短暂离心后，将离心管置于磁力架上静置，待磁珠完全吸附，小心吸弃液体。
10. 重复“二、手动提取步骤”中的步骤8和9。
11. 再次离心，尽量吸出残留液体，将离心管敞口室温放置5 min，使乙醇挥发干净。

注意：晾干至磁珠表面刚出现龟裂即可，过度干燥不利于核酸洗脱。

12. 将离心管从磁力架上取下，加入70 μL洗脱液，涡旋混匀。短暂离心后，65℃孵育8 min，期前可涡旋混匀以提高洗脱效率。
13. 短暂离心后，将离心管置于磁力架上静置，待磁珠完全吸附，小心将DNA溶液转移至新的离心管中，注意不要吸到

磁珠。

14. 核酸溶液保存于-20℃，长期保存需放置于-80℃。

Ver.CN20240311