Hieff® high purity exosome isolation kit(for Serum/Plasma) 高纯度血清/血浆外泌体抽提试剂盒

操作方法

一、样品预处理：

1、离心机在使用前先于 4℃预冷 10 min；

2、取样：如果是冻存样品，从冰箱取出后于 2-8℃条件下进行解冻待完全融化后置于冰上待用；如果是新鲜样品，置于冰上待用；

3、将样品按照 500 μL /管进行分装，不足部分用 1×PBS补足至500μL（单管处理体积）。

二、去除杂蛋白

1、取出Solution P1 放冰箱预冷10min ，置于冰上预冷；

2、在 500 μL 血液样品中 加入400μL 预冷的 Solution P1，立即将离心管盖紧，通过涡旋振荡器充分混匀 30s;

3、将混匀后的样品于 4℃以 12000 rpm 离心 20 min，杂蛋白沉淀后，取上清液转移至新的1.5mL离心管中；

三、外泌体提取

1、在上清液中加入 120 μL 的 Solution P2，离心管盖紧，通过涡旋振荡器充分混匀 2 min；再放置于室温下静置 5 min；

2、将装有混合液的离心管于 4℃以 12000 rpm 离心 15 min，弃上清；

3、重复步骤2（注：尽可能吸净上清液），并将 1.5 mL 离心管于室温下敞口静置 10 min；

4、取 200 μL 的 1×PBS 均匀吹打离心沉淀物，待其溶解后，将重悬液转移至新的 1.5 mL 离心管中；

5、将含有重悬液的 1.5 mL离心管于 4℃以 12000 rpm 离心 5 min，保留上清液，该上清液中富含外泌体颗粒；（注：此时可能有较多沉淀，为正常现象）

四、纯化外泌体

1、将收获的外泌体颗粒粗品转入 Exosome Purification Column（纯化柱）上室中，于 4℃以 5600 rpm 离心 20 min，离心后收集纯化柱管底的液体，此液体即为纯化后的外泌体颗粒；（注：纯化柱不可重复使用）。

2、纯化后的外泌体以50-100 μL 进行分装保存于-80℃低温冰箱中，以备后继实验使用。

五、外泌体除菌（可选）：

获得的外泌体后期需要与细胞共培养，可以使用0.22 μm的滤器进行过滤除菌。初次尝试时，外泌体浓度在10-100 μg/mL内做梯度摸索，选择一个较为合适的条件。

HB230210