52倍Taq高保真酶Hieff Canace^® Gold High Fidelity DNA Polymerase

Hieff Canace^® Gold High-Fidelity DNA Polymerase基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成。该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了热启动因子，极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。酶溶液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增速度达到15 sec/kb，扩增目的片段的长度可长达10 kb。本产品配备了优化缓冲液，添加了PCR增强组分，使得该酶适用于复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。

产品组分

产品应用

基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。

活性定义

用活性化的大马哈鱼精子DNA为模板/引物，74℃，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1 U。

质量控制

核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

切口酶残留检测：10 U本品和0.5 μg IL23R质粒，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

2）本产品仅作科研用途！

推荐PCR反应体系（冰上配制）

【注】： 
1）试剂使用：使用前要充分解冻混匀。
2）聚合酶浓度：推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化，请勿超过2 U/50 μL。
3）聚合酶添加：为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。
4）Mg2+终浓度：体系终浓度为1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。
5）高GC模板：在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。
6）不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）：
 

PCR扩增程序：有以下三种程序可选择，优先选择两步法程序

两步法程序（优先推荐）：                      

三步法程序（常规程序）：

梯度温度退火程序（难扩增基因推荐程序）:

【注】：

1）预变性温度和时间：推荐温度：98℃，时间：3 min，高GC含量模板5-10 min。
2）退火温度和时间：推荐温度：60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3）延伸温度和时间：推荐温度：72℃。时间：30 sec/kb，复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。
4）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端。
5）不同扩增程序下的特点：                                                                                                                        

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