Endotoxin Removal Kit 内毒素去除试剂盒

细菌内毒素可引起机体免疫功能受损，严重者可引发脓毒性休克，急性呼吸窘迫综合症，弥散性血管内凝血，全身炎症反应综合症或致命性多器官功能衰竭等。因此对于用于疾病治疗的基因药物、蛋白药物、单抗克隆药物、治疗性疫苗、小分子化学药物等生物制品必须通过一定的方法去除内毒素。

本试剂盒使用一类高效内毒素去除树脂，它以生物安全性极高的内毒素特异吸附物质为配体，经此亲和树脂纯化，样品最终的内毒素水平可＜0.1EU/ml。而且经过亲和纯化后没有对人体有毒害物质残余，适合抗体、疫苗等生物制品的内毒素去除。

产品性质

亲和树脂的主要特征：

产品组分

运输储存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期2年。

注意事项

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 本产品仅作科研用途。

使用方法

需另外准备的设备与试剂

1）铁架台；2）3 M的NaCl、0.1M的NaOH和0.1 M的HCl，用于调节样品pH值和离子强度。

1. 样品处理：样品在上样前建议离心或用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

实验中存在的若干因素都可能会影响内毒素去除效率，如：缓冲液的pH值，内毒素浓度，内毒素与树脂的接触时间，离子强度，温度以及样品的特性等。其中样品pH值和离子强度对于内毒素的去除效率影响尤其重要，纯化前可用处理过的氯化钠，0.1 M的NaOH或0.1 M的HCl来调节离子强度或pH值。

【注】：

① 虽然结合内毒素的pH范围在5-10，但是7-8的pH范围是纯化的最佳范围。

② 合适的离子浓度可降低非特异性吸附，保持0.15-0.5 M NaCl的条件可以得到一个较好的去除效果。

2. 活化树脂：将预装柱置于铁架台，垂直固定，去除顶部盖子，打开流速控制器，使保护液在重力作用下流干，加入5 mL

再生缓冲液（预冷），调节流速控制器，保持流速在0.25 mL/min（或1滴/6s），待再生缓冲液流干后再加入5 mL再生缓冲液（预冷），再重复操作2次，确保体系保持无热原存在。即使是第一次使用也必须进行这一步操作。该步操作大约需要60 mins完成。

3. 平衡树脂：活化完毕后加入6 mL的平衡缓冲液（预冷），沿柱管内壁均匀加入其中，保证清洗柱管的内壁，调节流速控制器，保持流速在0.5 mL/min（或1滴/3s），流干平衡缓冲液，再按此操作重复2次。这步操作大约需要40 mins完成。

4. 内毒素去除：取1.5 mL样品加到平衡后的层析柱中，调节流速在0.25 mL/min（或1滴/6 s），不接收流出液。当样品流

完，继续添加样品，样品可以加满柱管，同时收集流出液，即为除热原的样品。为了降低样品的损失，样品流完后，再添加1.5 mL平衡液，并与之前的流出液合并。检测样品浓度及内毒素水平。

5. 再次使用：如果流出样品内毒素水平未能达到预期值，需要将预装柱按照步骤2、3重新再生、平衡，然后上样纯化。

6. 保存条件：如果预装柱用完后需要保存，先用5 mL平衡缓冲液（预冷）平衡柱子，待平衡液流完，加入6 mL的保护液并于4 ℃保存。

附表 问题与解答

HB221107