NK-92MI(人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞)

一、NK-92MI细胞基本属性
细胞名称	NK-92MI(人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞)
细胞别称	NK-92MI；NK-92mi；NK92-MI；NK92MI；NK-92transfectedwithMFG-Hil2
细胞货号	SNL-195
来源	NK细胞；淋巴瘤；男性；50岁
细胞形态	淋巴母细胞样(聚团生长)
细胞类型
生长特性	悬浮细胞
收录	中科院NCACC
生物安全等级	2
致瘤性
培养条件	1640+10% FBS+1% P/S
培养环境	37℃；5% CO2；饱和湿度
细胞简介	NK-92细胞是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株IL-2依赖型NK细胞株。NK-92MI细胞是转染得到的源自NK-92细胞的IL-2非依赖的NK细胞株，亲本细胞NK-92通过微粒体基因转化法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2cDNA进行转化，可能由于载体整合到基因组DNA中，转化是稳定的。NK-92MI细胞细胞对很多恶性细胞有细胞毒性；铬释放试验显示它能杀死K562细胞和Daudi细胞。NK-92细胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面标记阳性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面标记阴性。NK-92MI细胞和NK-92CI细胞这两个变种都包含、表达并合成hIL-2cDNA。NK-92MI细胞合成的IL-2水平比NK-92CI高，而亲本细胞不合成表达。1998年9月提交到ATCC的培养物污染了支原体，其后代通过BM细胞周期蛋白处理21天消除支原体，处理后6周，用Hoechst染色、PCR和标准培养测试进行支原体检测，结果都呈阴性。
二、NK-92MI细胞培养操作
换液周期	2-3天
培养基体积	T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
传代比例	1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）
传代方法	1.混匀细胞，收集细胞培养基，900rpm离心3-5min，弃上清； 2.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里； 3.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；
注意事项	部分悬浮细胞会附着瓶底，轻轻晃动培养基或者吹打细胞面就会脱落，不需要胰酶消化。 建议使用培养皿培养，更适合吹打细胞操作，吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。
三、NK-92MI细胞冻存操作
冻存液配方	92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐);
冻存规格	200-300万/ml，1ml每管
冻存方法	1.离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞； 2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管； 3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80 度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20 度静置 2h 后转入-80 度过夜，第二天转入液氮保存。
注意事项	冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案

Tips：1.细胞增殖偏慢，均为悬浮生长，大部分细胞聚集成团，少数分散的细胞，并且细胞间隙会有较多的死细胞和细胞碎片； 2.该细胞对温度，吹打力度，培养条件均很敏感；培养基、PBS等建议复温至37℃再使用，吹打力度过大容易造成大量细胞死亡； 3.该细胞对培养基及血清要求较高，强烈建议选择尚恩生物NK92-MI专用培养基（货号SNLM-195）培养； 4.该细胞冻存难度较大，建议使用92% FBS+8%DMSO冻存液配方冻存； 5.该细胞复苏时建议将血清浓度提高至20%，待细胞可以正常聚集生长后再将血清浓度恢复至10%； 6.建议悬浮细胞密度维持在1E5-5E5/mL之间，密度过低或者过高可能会影响细胞状态；

我们推荐使用尚恩生物 人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞专用培养基（产品货号：SNLM-195）作为NK-92MI(人恶性非霍奇金淋巴瘤患者NK细胞)的专用培养基。