定点突变试剂盒 Hieff Mut™ Site-Directed Mutagenesis Kit

Hieff Mut™ Site-Directed Mutagenesis Kit是基于Hieff Clone™快速克隆技术的定点突变系统。使用本试剂盒，目标质粒扩增产物经DpnI消化、Hieff Clone™重组环化后直接进行转化即可完成定点突变。该试剂盒由两个模块组成：Hieff® II Pfu DNA Polymerase扩增模块和Hieff Clone®快速克隆模块。Hieff® II Pfu DNA Polymerase超高的保真度显著降低了扩增过程中引入新突变的可能性，其卓|越的长片段扩增能力，广泛适用于长度小于20 kb的任何质粒扩增。Hieff Clone®快速克隆系统利用高效的同源重组反应替代传统的退火成环反应。因此使用Hieff Mut™ Site-Directed Mutagenesis Kit进行DNA定点突变时，引物设计更加灵活，且扩增反应不再需要以线性方式进行，极大减少了模板使用量，有利于原始甲基化模板的彻底降解。Hieff Clone®技术可以高效完成两个PCR产物的无缝拼接，因此该试剂盒还能以单次扩增的方式对目标质粒上不连续的两个位点同时进行突变。

Hieff Mut™ Site-Directed Mutagenesis Kit中的重组酶Exnase经过优化，专门针对单碱基、不连续双碱基定点突变。此外，如扩增产物特异，其DpnI消化产物可不进行DNA纯化而直接用于重组反应。高度优化的反应缓冲液、快捷的操作流程以及极高的成功率，使得Hieff Mut™ Site-Directed Mutagenesis Kit成为DNA定点突变试剂盒。

应用范围

DNA定点突变

注：如使用本品对质粒进行定点突变，请使用甲基化酶无缺陷的宿主菌 (例如Top10、DH5α、JM109)扩增原始质粒！

产品组成

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。产品-20℃保存。有效期1年。

注意事项

1）引物设计时5’端反向互补区尽量选择无重复序列，且GC含量比较均匀的区域。当这一区域内GC含量在40%～60%范围之内时，重组环化效率将达到zui大。如这部分区域GC含量高于70%或者低于30%，重组环化效率会受到较大影响。

2）当两突变位点相距小于50bp时，应将其视为一个突变位点，将两突变引入同一条/对引物进行实验。

3）DpnI只能识别甲基化DNA，请务必使用从甲基化酶无缺陷的宿主菌中扩增的质粒作为PCR模板。

4）长期放置、反复冻融会导致模板质粒断裂、开环或降解，应使用新鲜制备的质粒作为模板。

5）质粒PCR扩增结果需高度特异，杂带较多会影响实验结果。

6）重组反应体系中应尽量避免金属络合剂(如EDTA)的带入。因此，建议将DNA纯化产物溶解在pH8.0的ddH2O中保存(常规胶回收试剂盒中的洗脱液可用pH8.0的ddH2O替代)，请勿使用TE进行DNA保存。

7）冷却后的重组反应产物应在1h内进行转化，且转化前保持在冰水浴中。如需储存，于-20℃冻存。尽量避免室温较长时间放置或4℃长期储存。

8）反应产物的转化体积不应超过感受态细胞体积的1/10，否则会降低转化效率。另外，当转化的DNA浓度太高时，会抑|制转化反应。将重组反应产物稀释5倍后取1/5进行转化。

9）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

10）本产品仅作科研用途！