Calcein,AM,Ultrapure Grade 钙黄绿素,超纯级

注意事项

1）对于微量试剂，开封前，请稍微离心一下，以保证粉末落入管底。

2）由于Calcein-AM对湿度非常敏感，本粉末保存的过程中一定要保持干燥。对于配制好的Calcein-AM储存液需要分装冻存，且必须紧紧密封盖子，干燥保存。Calcein-AM工作液必须现配现用。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4）本产品仅作科研用途！

使用方法

1. 储存液的配制

本品是以粉末形式提供的，根据工作液的浓度将其配制成1000×的储存液，储存液配制范围可为1～50 mM。例如使用的工作液为5 μM，那么可配制5 mM的储存液，也就是向50μg Calcein, AM（Mw：994.86）内加入10 μL 细胞培养级别的DMSO（CAS NO. 60313ES60）即可得到所需浓度的储存液。

2. 染色步骤

对于大部分细胞，钙黄绿素Calcein, AM的工作液浓度为2-5 μM。由于不同细胞系的最佳染色条件不同，初次实验建议做梯度实验，以确定 Calcein-AM的最适浓度。梯度筛选的原则为使用最低的探针浓度得到最好的荧光结果。

1）使用时，取一管适量的Calcein, AM储存液（1000×），用PBS（或Hanks和Hepes）缓冲液将其稀释成相应浓度的染色工作液。

【注】：有时候可添加一定量的非离子表面活性剂如Pluronic F127（Cat No. 60318ES60）到Calcein AM储存液内来增强其水溶性。制备染色工作液前，取一管需要用的Calcein AM储存液内加入等体积的20% Pluronic F127，使Pluronic F127的终浓度为0.02%。含Pluronic F127的Calcein AM溶液不可长期保存，现配现用。

2）对于贴壁细胞，先用胰酶-EDTA消化细胞，离心收集细胞（1000 rpm，3 min）。对于悬浮细胞，直接离心收集细胞。

3）去上清，用PBS（或者其他缓冲液）充分清洗细胞2~3次，以充分去除残留的酯酶活性。

4）用1/10细胞培养基体积的Calcein, AM染色工作液重悬细胞，37℃培养细胞15～30分钟。

【注】：如果细胞本身含有有机阴离子转运体，需加入丙磺舒（probenecid，1-2.5mM）或者苯磺唑酮（sulfinpyrazone，0.1-0.25mM）到孵育体系内以降低去酯化染料calcein泄露到胞外。

5）用PBS（或者其他缓冲液）洗涤细胞两次去除多余的染料。

【注】：如有必要，使用含有阴离子转运抑制剂的缓冲液来进行细胞清洗】

6）用含490 nm激发波长，515 nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。

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