猪乙脑病毒抗体ELISA检测试剂盒

一、猪乙脑病毒抗体ELISA检测试剂盒

通用名：猪乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine Japanese encephalitis virus (ELISA)

二、包装规格 96T×1/盒、96T×2/盒、96T*5/盒

三、预期用途 日本乙型脑炎又名流行性乙型脑炎是由日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）引起的一种急性人兽共患传染病。可引起猪乙型脑炎，主要特征为高热、流产、死胎和公猪睾丸炎。

猪乙型脑炎病毒抗体检测试剂盒用于检测猪血清、血浆中猪乙型脑炎病毒抗体，可用于猪乙型脑炎病毒疫苗免疫效果评价。

四、猪乙脑病毒抗体ELISA检测试剂盒原理

猪乙型脑炎病毒抗体检测试剂盒系由预包被猪乙型脑炎病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清、血浆样本中猪乙型脑炎病毒抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有猪乙型脑炎病毒抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有猪乙型脑炎病毒抗体。

五、试剂盒组成

酶标板、酶标记物、样品稀释液、浓缩洗涤液、底物液A、底物液B、阳性对照、阴性对照

六、储存及有效期

于2～8℃避光保存，有效期为12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

【样品准备】

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（如5μl血清加入195μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。

【检验方法】

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。

4.混匀，盖好盖板膜，置37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。

5.甩去孔内液体，每孔加350μl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，一次拍干。

6.每孔加酶标记物100μl，盖好盖板膜，置37℃避光反应30分钟。

7.洗涤，同步骤5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，盖好盖板膜，置37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值，。

【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照的平均OD值即ODNC应≤0.3，阳性对照的平均OD值即ODPC应≥0.6。

【检验结果的判定】

1.样品的OD值即ODS；

2.阈值计算：SP值=（ODS-ODNC）/（ODPC-ODNC）；

SP值≥0.2，结果判定为阳性；SP值＜0.2，结果判定为阴性。

3.本实验结果为阴性时表明猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。