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NLS-Cas9-BPNLS Nuclease

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详细介绍

 

NLS-Cas9-BPNLS Nuclease可以与引导RNA(guide RNA,gRNA)一起形成核糖核苷酸(RNP)复合物。使用RNP复合物进行基因编辑已被证明可以减少其他CRISPR基因编辑技术所遇到的问题,如病毒和质粒传递,脱靶效应、细胞活力和转录/翻译等。

NLS-Cas9-BPNLS Nuclease是一种无标签核酸酶,携带编码化脓性链球菌Cas9基因的质粒,N端双粒子核定位信号(BPNLS),C端核蛋白核定位信号(核蛋白NLS),BPNLS和核浆蛋白NLS能够显著提高基因编辑效率。

 

该产品具有以下特点:

编辑效率高:在体外和体内始终如一的高编辑效率。

无标签:不含额外的标记氨基酸。

无脱氧核酸:无外部 DNA添加到系统中。

 

产品信息

货号

11363ES50 / 11363ES60 / 11363ES76

规格

50 μg / 100 μg / 500 μg

来源

重组Cas9来源于大肠杆菌

物种

化脓性链球菌

标签

无标签

分子量

160 KDa

浓度

4 mg/mL

反应温度

37℃

溶剂

25 mM Tris、300 mM NaCl、0.1 mM EDTA, 50% 甘油, pH 8.0

 

组分信息

组分名称

11363S50

11363S60

11363ES76

NLS-Cas9-BPNLS Nuclease

50 μg(4 mg/mL)

100 μg(4 mg/mL)

500 μg(4 mg/mL)

 

储存条件

-25~-15℃保存,有效期1年。

 

使用说明

体外DNA裂解实验推荐反应体系

组分

20 μL反应体系

10×Reaction Buffer

2 μL

Substrate DNA

2 μL(80 ng/μL)

NLS-Cas9-BPNLS Nuclease

2-4 μL(25 ng/μL)

sgRNA

2 μL(50 ng/μL)

Nuclease-free water

To 20 μL

注意:

1) 溶液应充分混合,在37℃孵育1-2 h,然后加入1 μL的蛋白酶K(20 μg /μL),在55℃孵30 min孵育结束后,用琼脂糖凝胶电泳检测消化效率。

2) 此反应条件仅为推荐量,Cas9 : sgRNA的比例,一般建议1:2-1:5之间进行摸索。

3) 设计3-6条sgRNA,筛选效率最高的sgRNA。

切割效率检测示意图:

按上表所述,20 μL的反应体系,在含有线性化质粒、gRNA 和Cas9的1×Cas9核酸酶反应缓冲液中在37°C下反应1小时,在琼脂糖凝胶电泳测定结果显示,线性化质粒的消化效率为98.28%,远高于90%。

 

注意事项

1. 本产品仅作科研用途

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230321

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