Hifair® V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)

Hifair^® V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)是以 RNA 为模板进行多重定量 PCR 反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量 PCR 在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。

本试剂盒利用耐热 Hifair^® V Reverse Transcriptase 高效合成第一链 cDNA，并利用 UNICON^® HotStart Taq DNA

Polymerase 进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的 MP Buffer，Enzyme Mix 等，缓冲液中已含有 Mg²⁺和 dNTP , 有效

抑制非特异性 PCR 扩增的因子和提升多重 qPCR 反应扩增效率的因子，能够在保证引物扩增效率的同时，进行多重扩增反

应。并添加了 dUTP/UDG 系统，可有效防止气溶胶污染的风险。

组分信息

【注】1. 2×Hifair^® V MP Buffer 为Hifair^® V Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer 的简写,其中包含dNTPs, dUTP, Mg²⁺ , stabilizers和enhancers等。

2. Hifair^® V Enzyme Mix 主要包含有耐热 Hifair^® V Reverse Transcriptase、UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase 和 UDGase。

储存条件

-25~-15℃保存，有效期1年。

使用说明

1. 反应体系（以25 μL为例）

【注】使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

      1）引物探针混合液浓度：Primer/Probe Mix 中包含多对引物和探针，通常每条引物终浓度可以根据情况在0.1-1.0 μM 间进行调整；探针终浓度可以根据对荧光曲线和荧光增峰的要求在 0.05-0.5 μM 范围内进行调整。 

2） 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。

3）体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头；避免交叉污染和气溶胶污染。

2. 参考扩增程序

1)常规扩增程序

2. 快速扩增程序

【注】a. 逆转录：42℃或者50℃均可。

b. 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。

c. 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。

3. 适用机型

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；

Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；

Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；

Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；

Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230918