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PCR琼脂糖凝胶电泳后发现核酸向负极方向反着跑到胶的头部了,怎么回事?

王玲玲787878    2011-02-26    核酸电泳    浏览 981 次

我研究的方向是分子生物学,这几天一直在做细菌核酸提取及16SrDNA通用片段常规PCR检测,提取核酸方法是用水煮法,可每次PCR完跑电泳后,发现结果都是核酸向负极方向反着跑了,和Marker方向相反,跑到槽的上方,查了好多资料就是没说到这方面的原因,然后换了用... 我研究的方向是分子生物学,这几天一直在做细菌核酸提取及16SrDNA通用片段常规PCR检测,提取核酸方法是用水煮法,可每次PCR完跑电泳后,发现结果都是核酸向负极方向反着跑了,和Marker方向相反,跑到槽的上方,查了好多资料就是没说到这方面的原因,然后换了用QIAGEN的试剂盒提取,还是出现了一样的结果,我做的是革兰氏阴性菌的,理论上应该很简单,可就是见鬼了,望大家能帮忙解决,毕业实验时间迫在眉睫了...

精彩问答
灏爱灏爱你4z 发布日期:2011-02-27
这里有个论坛,讨论这事
http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/18605.html
你看看有没有他们提到的任何一种情况?

还有,你做的是PCR,可以看到有未结合的引物在下方,而你在上方的那些条带看起来并不是PCR产物(太长)。PCR产物看起来应该和Marker类似(形状)。建议你换个PCR试剂盒看看。
全部评论
sy呵呵xx 发布日期:2011-02-27
这个不是跑反了吧,好像是没有跑出来啊,你看下面很小的地方还有东西呢,你是提的基因组吗?基因组很大,没跑出进样孔很正常啊
jonguoyong 发布日期:2011-02-27
marker跑的没问题,说明这不是电泳的事儿,你PCR有阳性对照吗?阳性对照检查你PCR体系是否正常,16S的引物是否新合成的,用其他菌PCR试试,以确定你提取的基因组是否有问题,向上跑的一般是杂质能结合EB并且带正点荷。
办公室的KPI 发布日期:2011-03-02
我也觉得那个亮亮的不是DNA,感觉PCR就没P出来,你提完基因组跑没跑过?再有你提的时候菌是不是比较老啊,杂质多的话可能也会影响PCR,还有看看引物单看他们有没有合错~
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