纤维素酶的检测方法

1. 纤维素CMC酶
1.0标题
用3.5一二硝基水杨酸法测定纤维素CMC酶活性单位。 2.0范围
生产分析和质量控制部门适用。 3.0原理
纤维素CMC酶（EC3.2.1.4）水解羧基纤维素分子中β－1.4葡萄糖苷键，释放出的还原糖(以葡萄糖计)与3.5二硝基水杨酸(DNS)反应，产生颜色变化，这种颜色变化与释放还原糖(以葡萄糖计)的量成正比关系，即与酶样品中的酶活性成正比。通过在550nm的光吸收值查对标准曲线(以葡萄糖为标准物)可以确定还原糖产生的量，从而确定出酶的活力单位。 4.0试剂
4.1无水醋酸钠(分析纯) 4.2冰醋酸(分析纯) 4.3 3.5－二硝基水杨酸 4.4无水葡萄糖
4.5四水酒石酸钾钠(分析纯) 4.6氢氧化钠(分析纯) 4.7重蒸苯酚(分析纯) 4.8无水亚硫酸钠(分析纯) 4.9叠氮化钠(分析纯) 4.10羧甲基纤维素钠 5.0仪器
5.1水浴锅(恒温)50±1℃ 5.2电热干燥箱80±1℃ 5.3 722型分光光度机计 5.4分析天平感量0.1㎎ 5.5一级玻璃制品 5.6电冰箱 6．0试剂的准备
6．1乙酸－乙酸钠缓冲溶液（PH=4.8）
溶液A：量取冰醋酸6ml，定容至1000ml，制成0.1M醋酸钠溶液。 溶液B：称取8.2g醋酸钠，溶解后容至1000ml，制成0.1M醋酸钠溶液。 以A：B=4：6的比例混合，低温冷藏备用。 6.2 DNS试剂:
溶液A:称分析纯NaOH 104g溶于1300ml水中，加入30g分析纯3.5一二硝基水杨酸。 溶液B:称分析纯酒石酸钾钠910g，溶于2500ml热水中，再称取25g重蒸苯酚和25g无水亚硫酸钠加入酒石酸钾钠溶液。
将A、B溶液混合，定容至5000ml，贮存于棕色瓶中，暗处放置一星期后可使用。 6.3 CMC溶液：用羧甲基纤维素钠（CMC）以PH4.8醋酸缓冲液配成1%的溶液。 7．0标准曲线制作：
7.1无水葡萄糖80℃烘干至恒重。
7.2准确称取1.000g溶于1000ml水中，加10mg叠氮化钠防腐，4℃冷藏备用。 7.3标准葡萄糖曲线制作

1 酶的活力测试方法现状：?纤维素酶是由霉菌等培养得到的一个自然的多组份混合物，它的生物催化作用可以使纤维素纤维发生水解，有效地控制水解速度和水解率可以得到纤维素纤维织物的不同处理要求，纤维素酶对纤维素纤维的作用分四个程序；渗入，内切，外切，糖化。?渗入决定于酶的分子量大小和纤维的内表面可及度，内切(在任意部位把纤维素苷键切断)主要决定于组份中Cx酶的活力，外切(在纤维素的一端顺序切下一个个双糖)主要决定于C1酶的活力，糖化决定于把多糖转化为单糖的葡萄糖酶Co的活力。多种组分的各自活力和协调构成了单位时间内纤维素纤维的降解糖化量，酶的活力测定对织物酶处理工艺设计有重要意义。? 酶的活力测定，有称作催化活力测定，测定方法有；滤纸崩溃法，总糖比色法，粘度法……等。滤纸崩溃法属于定性检测，总糖比色法ZD反映C1与Co的协调作用，粘度法ZD反映Cx与C1的协调作用，两者都可以用作定量测定。至今活力测定尚未有统一的方法，表示活力大小的计量单位更是多种多样，丹麦NOVODISK(诺和诺得公司)早期采用总糖比色法（AF187．2／1－GB 82－08－10）一分钟水解产生1μmol葡萄糖称为一个NCU活力单位（NCU＝NOVO Cellulase Unit）。后来又采用粘度法（AF275／1－GB 1989－02－03）用一种活力为880EGU的内切葡聚糖酶，以其作用于CMC的粘度曲线为对比标准，测得的对应值以EGU／克作为一个内切酶活力单位（EGU＝Endo Glucase Unit）。