目前复杂基质中四环素类化合物的检测方法主要参照GB/T 23409-2009、GB/T 23409-2009、 GB/T 20764-2006和GB/T 22990-2008。但是国标的方法普遍存在以下的缺陷：
安谱实验成功开发出CNW II代四环素检测专用SPE专用柱，与HLB串联使用，针对各种复杂食品基质（蜂蜜、牛奶、猪肉、猪肝等），实验过程方便，无需氮吹，回收率高且稳定，杂峰少。
一、样品前处理
准确称量2g样品（精确到0.01g），加入四环素标品（上机的加标浓度5ppm），加入20mL Na2 EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液，涡旋混合2min后，于35°C超声20min，然后4000r/min，离心10min，上层溶液过滤至另一个50mL离心管。重复提取一次，上清液过滤后收集，将两次过滤后的溶液混合，取10mL上清液后离心取上清，待上样。
二、SPE操作过程
小柱：Poly-sery HLB小柱 (SBEQ-CA3181)
活化：5mL甲醇
平衡：10mL水
上样：提取液
淋洗：5mL甲醇-水溶液（5: 95）
洗脱：5mL甲醇，洗脱后，向洗脱液中加氨水，使pH值在8-10之间。
小柱：CNW II代四环素检测专用SPE小柱（复杂基质）(SBEQ-CA6980)
活化：5mL甲醇
平衡：5mL 5%氨水甲醇
上样：HLB小柱的洗脱液
淋洗：5 mL 甲醇
洗脱：4mL洗脱液（甲醇-乙腈-0.01M草酸（pH 2.00）1.5: 1.5: 7）
从洗脱液中取部分样品至2mL进样小瓶，待HPLC-UV检测
三、色谱条件
色谱柱：Athena C18, 250mm*4.6mm，5µm
流动相：乙腈/甲醇/草酸（0.01M）=1.5:1.5:7，pH=2.0
流速：1.0mL/min
柱温：30°C
进样量：10µL
检测器：紫外（361nm）
四、实验谱图
五、实验数据
结论：HLB+四环素专用柱在净化复杂基质时，可以避免HLB+WCX的柱子回收率骤降的现象，保证高回收率，同时可以去除许多杂质。
六、实验耗材
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