【在线研讨会】高JZ数字PCR六色Panel同时检测乳腺癌Her2/PIK3CA突变解决方案

数字PCR为第三代PCR技术，凭借较高灵敏度和jingzhun度广泛应用于核酸检测领域。目前，越来越多的领域都会用到数字PCR（dPCR）技术，但关于实验细节和结果评估缺少一个共识。在很多发表的文章中都缺乏足够的dPCR实验细节，这样不利于评审文章，甚至难以根据文章重复实验。

本期在线研讨会给大家介绍通过6色荧光数字PCR技术检测乳腺癌相关靶点，并借此阐述了整个数字PCR操作流程以及如何运用MIQE，希望对大家的文章发表能有所帮助，少走弯路，多发好文章。

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如今，随着快速无创筛查、癌症检测以及临床测序应用的扩大，诊断行业已经铺平了通往JZYL时代的道路。随着市场对更kuai、更jingque诊断的需求，以及监管的不断发展，诊断专业人士需要一个能够帮助他们建立伙伴关系、获取行业知识、与同行建立网络并从同行那里学习的综合平台，共同讨论诊断行业的发展、里程碑、挑战和机遇。第12届Next-Generation Dx峰会将于8月25日-27日（美东时间）进行线上举办。

会议期间Stilla Technologies公司也将聚焦“液体活检”进行交流互动，针对6色Crystal Digital PCR™系统的多重检测能力进行zuixin技术的分享，大家可以观看Stilla Technologies应用专家Kimberley Gutierrez博士的演讲，并且在会议现场可以访问我们的线上展位。

Kimerley Gutierrez博士将介绍Stilla的6色Crystal Digital PCR™系统，并阐述其是如何创建1个panel可同时对至少6个癌症突变位点进行检测。该报告将于美国东部时间8月25日下午1点25分在“液体活检”ZT节目中播出。

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时间

2020年8月25-27日（美东时间）

会议ZT日程

2021年4月13日，深蓝云Gene-π数字PCR学堂——数字PCR病毒载量检测工具（北京站）在国家疾控ZX成功举办。为更好的服务于用户，本次培训班以理论结合实践的形式，聚焦数字PCR原理系统、实验操作、结果分析，病毒载量检测等核心内容，受到了用户的一致好评。

数字PCR技术的诞生和发展为核酸定量和核酸检测提供了全新的思路。无需标准品和标准曲线，可提供比qPCR的核酸定量，直接读取阳性信号，通过泊松分布校正得到目标基因的JD拷贝数，并具有高灵敏度等特点。

本次训练营对第三代数字PCR技术及naica®️微滴芯片式数字PCR技术介绍、naica®️数字PCR核酸JD定量技术中的病原体检测应用、病毒载体JD拷贝浓度数字PCR检测实验设计、特别是一步法数字PCR新冠病毒检测试剂盒的使用和结果判读等方面进行了详细介绍，同时进行实操。

▲ 专家在进行精彩的分享

▲ 实验操作

作为数字PCR头部企业技术开创者的法国Stilla Technologies公司于2019年提出数字PCR在线学习资源ZXgene-π学堂，为使用和即将使用数字PCR技术的专家学者提供有效的途径，同时开展Gene-π数字PCR线下实操培训课堂，为用户提供完善的服务以及优化的应用解决方案。

naica®微滴芯片式数字PCR系统

naica®微滴芯片式数字PCR系统，以Sapphire芯片（全自动）或Opal（高通量）芯片为耗材，形成25,000-30,000个微滴的2D阵列，以单层平铺方式进行PCR扩增实验。反应完成后对微滴进行三色通道或六色通道检测，从而对起始核酸浓度进行JD定量。2.5小时内，可快速获得结果。

【数字PCR网络研讨会】

在CRISPR编辑的细胞系中

使用数字PCR进行标记拷贝数评估

       11月19日北京时间23:00（巴黎时间：17:00），欧洲分子生物学实验室研究员Moritz Kueblbeck将于Genomeweb平台在线分享“在CRISPR编辑的细胞系中使用数字PCR进行标记拷贝数评估”相关知识。

本网络研讨会将介绍如何使用dPCR快速定量CRISPR编辑的HeLa细胞中的绿色荧光蛋白拷贝数。讨论还将介绍dPCR的工作原理和采集后的数据分析方法。

Moritz Kueblbeck在德国海德堡的癌症研究ZX(DKFZ)做了八年的研究技术员。2014年,他加入了Jan Ellenberg在海德堡的欧洲分子生物学实验室,在不同实验室的项目中，他使用CRISPR/Cas9方法利用内源性的标记蛋白(在HeLa和U-2 OS细胞进行不同标签的纯合敲入)进行人类细胞系基因组编辑。

内容简介

l  荧光蛋白或自标记是使用荧光显微镜研究活细胞中蛋白质动力学的宝贵工具。然而，定量成像需要目标蛋白(POI)的生理表达水平，特别是当需要研究POI的化学计量相互作用时。

l  CRISPR使研究人员能够标记几乎任何感兴趣的目标基因，使其可以研究相应POI的生理表达水平。然而，正确编辑细胞克隆的产生和选择——即标记等位基因的预期数量和缺乏额外的整合——需要对标记的拷贝数进行定量评估。

l  探讨dPCR是一种快速、可靠的荧光标记CRISPR编辑细胞定量检测方法。

注册页面

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https://event.on24.com/eventRegistration/EventLobbyServlet?target=reg20.jsp&partnerref=stilla&eventid=2111188&sessionid=1&key=2206BD6DA2548F0F9C46911E3A71DDB4®Tag=&sourcepage=register

法国Stilla Technologies公司开发的—款多重PCR专用预混液：naica^®multiplex PCR MIX（见表1），专用于naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统的多重检测。并对naica^®multiplex PCR MIX的多重检测性能进行了详细评估。当面对有限的样本量时，可保证多重数字PCR检测的灵敏度和准确性；在复杂背景基因存在的情况下，依然能精确检出低丰度的目的基因。

★ naica^®multiplex PCR MIX在naica^®六通道微滴芯片数字PCR上进行6个靶标的同步准确定量

采用0.2~13000cp/ul的DNA样品，使用10X naica^®multiplex PCR MIX在naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统上进行6个靶标的线性范围分析，结果显示6个靶标的R²均＞0.99，说明在naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统上，能够可靠地实现6靶标同步准确定量（图1)。与2X和5X浓度的数字PCR预混液(dPCR Mixes)相比，10X浓度的数字PCR预混液体积加入量降低了50％至80％，最大限度地提高样品加入量。尤其是在检测低浓度样品或稀有靶标时，样品加入量的增加可提高检测灵敏度。

▲ 图1：使用naica^®multiplex PCR MIX在naica^®六通道微滴芯片数字PCR上进行6个靶标的线性分析，分别在蓝色、青色、绿色、黄色、红色和红外线6个通道进行检测。每个稀释点的DNA浓度分别为：0.2、1.5、8.0、50、320、2050和13000 cp/ul，每个稀释度进行3次重复。结果显示6个靶标的R2均大于0.99，说明所有靶标的结果都高度真实可靠。

★ 在复杂的背景基因下，对低丰度目的基因进行精确定量

数字PCR的—个重要技术优势是能够在存在多个靶标扩增的情况下检测到低浓度靶标。为了评估naica^®multiplex PCR MIX的稳定性。使用同一个目标DNA模板的不同浓度系列稀释液（0.2~ 13000 cp/uL)进行检测，同时其中掺入5种外部靶标模板（每个靶标的浓度为3000 cp/ul)。在不同测试条件下，结果均呈现良好的线性关系（图2A和2C)。这些结果与同一DNA 靶点在不同浓度下单独检测以及在不添加外部靶标的情况下获得的结果具有可比性（图2B和2D）。

▲ 图2：使用naica^®multiplex PCR MIX的扩增结果真实可靠。将pUC18质粒（图A和B)和pUC57质粒（图C和D)的13000至0.2 cp/ul的系列稀释液在5个外部扩增靶标背景下（每个靶标为3000 cp/ul(A,C)）和在不含外部靶标(B,D)的情况下进行定量检测，3次重复。线性拟合系数 R2>0.99，表明在不考虑多重背景的情况下，对所有靶标的测定结果都是真实可靠的。5个外部靶标的相对标准偏差保持在2.3％至3.1% (n=21)，显示出极好的重复性。

★ naica^®multiplex PCR MIX应用亮点

☑  实现数字PCR方法多重检测的高度稳定性和高检测灵敏度；

☑  可在naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统的动态范围内同时定量检测6个独立的DNA靶标，均具有良好线性关系；

☑  5X和10X的数字PCR预混液，提高了naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统高阶多重检测能力；

☑  10X PCR MIX比5X PCR MIX降低50％的体积用量，从而增加DNA的加入量。在检测低浓度样品或稀有靶标时，样本加入量的增加可提高检测灵敏度。

表1 naica^®multiplex PCR MIX货号及规格

naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统

法国Stilla Technologies公司naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片式数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的拷贝数浓度。

11月19日北京时间23:00（巴黎时间：17:00），欧洲分子生物学实验室研究员Moritz Kueblbeck将于Genomeweb平台在线分享“在CRISPR编辑的细胞系中使用数字PCR进行标记拷贝数评估”相关知识。

本网络研讨会将介绍如何使用dPCR快速定量CRISPR编辑的HeLa细胞中的绿色荧光蛋白拷贝数。讨论还将介绍dPCR的工作原理和采集后的数据分析方法。

Moritz Kueblbeck在德国海德堡的癌症研究ZX(DKFZ)做了八年的研究员。2014年,他加入了Jan Ellenberg在海德堡的欧洲分子生物学实验室,在不同实验室的项目中，他使用CRISPR/Cas9方法利用内源性的标记蛋白(在HeLa和U-2 OS细胞进行不同标签的纯合敲入)进行人类细胞系基因组编辑。

内容简介

l  荧光蛋白或自标记是使用荧光显微镜研究活细胞中蛋白质动力学的宝贵工具。然而，定量成像需要目标蛋白(POI)的生理表达水平，特别是当需要研究POI的化学计量相互作用时。

l  CRISPR使研究人员能够标记几乎任何感兴趣的目标基因，使其可以研究相应POI的生理表达水平。然而，正确编辑细胞克隆的产生和选择——即标记等位基因的预期数量和缺乏额外的整合——需要对标记的拷贝数进行定量评估。

l  探讨dPCR是一种快速、可靠的荧光标记CRISPR编辑细胞定量检测方法。

注册地址：https://event.on24.com/eventRegistration/EventLobbyServlet?target=reg20.jsp&partnerref=stilla&eventid=2111188&sessionid=1&key=2206BD6DA2548F0F9C46911E3A71DD

安东帕在线研讨会持续更新中，点击您感兴趣的“主题”，报名参加！

主题：建筑材料表征-从原料材料到成品

时间：2022-05-11, 15:00 - 18:00

主题：炭黑表面积测量-橡胶填料、黑色颜料和电池导电剂

时间： 2022-05-11, 21:00 - 22:00

主讲人：Dr. Martin Thomas

主题：用SAXSpoint 5.0探索纳米世界

时间：2022-05-18,15:00 - 15:45 

主讲人：HeinerSantner, PhD

主题：从辅料处理到制片：制药行业的粉体流变解决方案

时间：2022-05-24,16:00 - 17:00 

主讲人：Dr.Helena Weingrill Marion

注册：iphone手机需复制链接，浏览器打开

全封闭Naica数字PCR新型冠状病毒超敏检测方案

Cycloud与MicroFuture合作

深蓝云生物科技与北京微未来科技，基于国家疾控ZX和WHO推荐区域，针对2019新型冠状病毒的四段保守序列作为检测靶标，开发超敏的数字PCR检测方法和快速的定量PCR检测方法。

【图源：北京微未来科技】

区段分别为：RdRP基因（特异性靶点），E蛋白基因，N蛋白基因，保守基因S区位点。确保对2019新型冠状病毒鉴定的高度特异性和灵敏度。      

与人冠状病毒HcoV-229E、 HcoV-HKU1、 HcoV-OC43、 HcoV-NL63等型无交叉。

深蓝云生物科技以专业服务科学为使命，愿所学，以致用，共战病毒！

北京微未来科技有限公司以“解码病原微生物，致力于传染病防控”为企业使命。与北京深蓝云生物科技共同在病毒的超敏检测的数字PCR方法展开深入合作。 

联系方式：

公司名称：北京深蓝云生物科技有限公司
联系电话：010-57256059
E-mail：info@cycloudbio.com

在2021版的Methods in Molecular Biology·Lung Cancer第10章(127页开始)介绍了使用naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统检测NSCLC患者ctDNA样本中的19种活化和耐药位点，并对检测方法进行了详细的描述。

naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统检测流程

文中阐述，naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统多重检测速度快，每个患者样本可获得大量突变信息，通过naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统进行液体活检可实现高灵敏度和高效的治疗监测，早期发现治疗耐药性。

Methods in Molecular Biology是Springer出版的权威分子生物学方法学系列著作，共1110册，涵盖了生物学的方方面面。包括生命科学、药物科学、化学、药学、材料学、细胞生物学、生物化学、人类基因组学、植物性、免疫学等。Lung Cancer就肺肿瘤生物学常用的实验方法进行了深入的讨论和细致的描述，包括用于建立肺癌诊断和预后的相关研究方法。

naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统

法国Stilla Technologies公司naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片式数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的拷贝数浓度。