2021年的DY个新品：naica® dPCR Mixes上

naica® dPCR Mixes介绍：

Stilla Technologies公司在今年推出全新的试剂产品线--naica® dPCR Mixes，专门用于数字PCR分析。为了提高检测效率和检测灵敏度，同时开发了适用于荧光探针（TaqMan®）检测和嵌合染料（EvaGreen®）检测的PCR预混液。本系列产品属于即用型预混液，是Naica™ Crystal微滴数字PCR系统的ZJ搭档，包括naica® PCR Mix和naica® multiplex PCR Mix，提供5x和10x浓度，可以大幅度地提高检测灵敏度，同时保证反应的灵活性。

naica® dPCR Mixes特点

☑ 兼容TaqMan® 和EvaGreen®检测。

☑ 高耐受性：复杂样本仍然可以得到高质量的实验结果。

☑ 高特异性：广泛适用于各种反应条件。

☑ 高灵敏度：JZ定量低浓度样品和稀有目标的检测。

☑ 宽动态范围：多重反应的动态范围可与单重反应相媲美。

naica® dPCR Mixes分类：

★ naica® multiplex PCR MIX

naica® multiplex PCR MIX 是一种即用型双组分预混液（包括Buffer A和Buffer B），适用于Naica™ Crystal微滴数字PCR系统的TaqMan®探针法多重检测。本制品的核心成分是一种GX的热启动DNA聚合酶，在95°C下只需3分钟的激活时间，使用时加入模板、引物探针和水即可，其多重反应的动态范围可与单重反应相媲美。10x预混液极大地降低Mix用量，额外的体积可被样本、探针或引物所利用，进而提高多重反应效率，并为低浓度样品或稀有靶标提供优越的检测灵敏度。

★ naica® PCR MIX

naica® PCR Mix 是一种即用型双组分预混液（包括Buffer A和Buffer B），适用于Naica™ Crystal微滴数字PCR系统的Eva Green®染料法检测。本制品的核心成分是一种GX的热启动DNA聚合酶，可大幅度地提高检测灵敏度和特异性。

法国Stilla Technologies公司开发的—款多重PCR专用预混液：naica^®multiplex PCR MIX（见表1），专用于naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统的多重检测。并对naica^®multiplex PCR MIX的多重检测性能进行了详细评估。当面对有限的样本量时，可保证多重数字PCR检测的灵敏度和准确性；在复杂背景基因存在的情况下，依然能精确检出低丰度的目的基因。

★ naica^®multiplex PCR MIX在naica^®六通道微滴芯片数字PCR上进行6个靶标的同步准确定量

采用0.2~13000cp/ul的DNA样品，使用10X naica^®multiplex PCR MIX在naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统上进行6个靶标的线性范围分析，结果显示6个靶标的R²均＞0.99，说明在naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统上，能够可靠地实现6靶标同步准确定量（图1)。与2X和5X浓度的数字PCR预混液(dPCR Mixes)相比，10X浓度的数字PCR预混液体积加入量降低了50％至80％，最大限度地提高样品加入量。尤其是在检测低浓度样品或稀有靶标时，样品加入量的增加可提高检测灵敏度。

▲ 图1：使用naica^®multiplex PCR MIX在naica^®六通道微滴芯片数字PCR上进行6个靶标的线性分析，分别在蓝色、青色、绿色、黄色、红色和红外线6个通道进行检测。每个稀释点的DNA浓度分别为：0.2、1.5、8.0、50、320、2050和13000 cp/ul，每个稀释度进行3次重复。结果显示6个靶标的R2均大于0.99，说明所有靶标的结果都高度真实可靠。

★ 在复杂的背景基因下，对低丰度目的基因进行精确定量

数字PCR的—个重要技术优势是能够在存在多个靶标扩增的情况下检测到低浓度靶标。为了评估naica^®multiplex PCR MIX的稳定性。使用同一个目标DNA模板的不同浓度系列稀释液（0.2~ 13000 cp/uL)进行检测，同时其中掺入5种外部靶标模板（每个靶标的浓度为3000 cp/ul)。在不同测试条件下，结果均呈现良好的线性关系（图2A和2C)。这些结果与同一DNA 靶点在不同浓度下单独检测以及在不添加外部靶标的情况下获得的结果具有可比性（图2B和2D）。

▲ 图2：使用naica^®multiplex PCR MIX的扩增结果真实可靠。将pUC18质粒（图A和B)和pUC57质粒（图C和D)的13000至0.2 cp/ul的系列稀释液在5个外部扩增靶标背景下（每个靶标为3000 cp/ul(A,C)）和在不含外部靶标(B,D)的情况下进行定量检测，3次重复。线性拟合系数 R2>0.99，表明在不考虑多重背景的情况下，对所有靶标的测定结果都是真实可靠的。5个外部靶标的相对标准偏差保持在2.3％至3.1% (n=21)，显示出极好的重复性。

★ naica^®multiplex PCR MIX应用亮点

☑  实现数字PCR方法多重检测的高度稳定性和高检测灵敏度；

☑  可在naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统的动态范围内同时定量检测6个独立的DNA靶标，均具有良好线性关系；

☑  5X和10X的数字PCR预混液，提高了naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统高阶多重检测能力；

☑  10X PCR MIX比5X PCR MIX降低50％的体积用量，从而增加DNA的加入量。在检测低浓度样品或稀有靶标时，样本加入量的增加可提高检测灵敏度。

表1 naica^®multiplex PCR MIX货号及规格

naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统

法国Stilla Technologies公司naica^®六通道微滴芯片数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片式数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的拷贝数浓度。

【网络研讨会】dPCR在量化常用于诊断和选择靶向ZL的基因CNVs方面的应用
2月27日北京时间24:00（巴黎时间：17:00），来自LGC国家计量实验室的Dr. Alexandra Whale将于Genomeweb平台在线分享“dPCR在量化常用于诊断和选择靶向ZL的基因CNVs方面的应用。”

 本次网络研讨会将ZD讨论dPCR在量化常用于诊断和选择靶向ZL的基因CNVs方面的应用。利用乳腺癌中的HER2基因的模型，研究dPCR测量基因拷贝数的微小变化的能力，并进一步研究以开发方法来抵消可能由样品中连锁的目标拷贝数引起的测量偏差。此外，还将ZD介绍dMIQE指南更新版本中的关键dPCR性能参数，从而促进dPCRZ佳实践以及将dPCR作为金标准方法。

Alexandra Whale是位于LGC的国家计量实验室(NML)的分子和细胞生物学团队中核酸创新的科学带头人。NML是英国化学和生物分析测量的指定机构。自2009年加入以来，她的研究集中在数字PCR的广泛应用，包括与微生物和KJ素耐药性相关的DNA的定量和检测，以及癌症中拷贝数变异和罕见序列的检测。
内容简介
自2013年数字MIQE指南:数字定量PCR实验发表的Z低信息(the Digital MIQE Guidelines: Minimum Information for publication of Quantitative Digital PCR Experiments, dMIQE)发布以来，dPCR的应用范围大幅扩大，如与疾病诊断相关的单核苷酸变异(single nucleotide variance, SNVs)和拷贝数变异(copy number variance, CNVs)的检测。与此同时，国际计量组织，如LGC的国家计量实验室(NML)，一直致力于开发SI可追溯的分子方法，以支持将这些应用转化为临床。数字PCR有可能成为一种可追溯的方法，因为靶标的浓度是根据目标阳性分区的比例和泊松统计的应用来计算的。
利用乳腺癌中的HER2基因的模型，我们将研究dPCR测量基因拷贝数的微小变化的能力，并进一步研究以开发方法来抵消可能由样品中连锁的目标拷贝数引起的测量偏差。此外，还将ZD介绍dMIQE指南更新版本中的关键dPCR性能参数，从而促进dPCRZ佳实践以及将dPCR作为金标准方法。