聚焦 RNA，安捷伦 Cary 3500 分光光度计智启纯度评估新高度

在生物制药领域，核糖核酸（RNA）的质量控制至关重要，直接关系到基因表达研究的可靠性和药物制造的安全性。传统RNA纯度评估通常依赖于 260nm 和 280nm 的吸光度比值测量。然而，这种方法存在局限性，因为RNA样本缓冲液的 pH 值和离子强度变化会影响 A260/280 比值，进而影响纯度评估的准确性。

聚焦以上挑战，Agilent 的研究团队精心设计一系列实验，深入探讨了这些因素对 RNA 纯度评估的影响，并据此提出了改进方法。本研究使用 Agilent Cary 3500 Multicell Peltier UV-Vis 分光光度计进行实验，并借助 Agilent Cary UV Workstation 软件完成数据采集。

实验包括三个部分：

1、研究 pH 值和 Na₂HPO₄ 浓度对 RNA 的 A260/280 比值和吸收度的影响。

2、研究 pH 值和离子强度对 RNA 中溶解的 BSA 蛋白的 A260/280 比值的影响。

3、对 HeLa RNA 在 1 mM Na₂HPO₄、TNE 缓冲液和水中的 UV 吸收扫描分析。

图 1. pH 值和 Na2HPO4 的浓度在（A）A260/280 比率和 （B）吸光度上的影响。（C）260 nm 和 280 nm 处吸光度的百分比变化

实验数据显示，随着 RNA 样本缓冲液 pH 值和 Na₂HPO₄ 浓度的增加，A260/280 比值显著上升，尤其是在 pH 值 7.2 至 8.6 和 Na₂HPO₄ 浓度 0.02 至 1 mM 的区间内，其增长尤为明显。这一发现表明，通过精确控制缓冲液的pH值和离子强度，可以更准确地评估 RNA 的纯度。

图 2. 在蛋白质存在或不存在的情况下，pH 值和离子强度对 RNA A260/280 比率的影响。（A） 在 10 mM Na₂HPO₄ 中分别加入 RNA、蛋白质和 RNA 加标蛋白质的吸光度曲线（B） RNA、蛋白质和 RNA 加标蛋白质分别在 0.01 至 10 mM Na₂HPO₄ 中的 A260/280 比率图

可观察到，在 10 mM Na₂HPO₄ 中加入蛋白质前后，RNA 的 A260/280 比值从 2.15 降至 1.61，表明蛋白质改变了 RNA 的吸收度。且在水和 1.0 mM Na₂HPO₄ 中，RNA与蛋白质的 A260/280 比值分别下降了 19.1% 和 26.6%，表明在碱性条件下 RNA 样本中蛋白质污染的检测灵敏度显著提高，这对于确保 RNA 样本保持高质量具有重要意义。

图 3. 在水、TNE 缓冲液和 1 mM Na2HPO4 中测试 HeLa RNA 的吸光度曲线

1 mM Na2HPO4 和 TNE 缓冲液中的 RNA 吸收光谱相似，而水中的 RNA 光谱则向更高波长移动。建议使用碱性缓冲液溶解提取的 RNA。

图 4. Agilent Cary 3500 Multicell Peltier UV-Vis 分光光光度计硬件与软件设置（内置算法）

Agilent Cary 3500 Multicell Peltier UV-Vis 分光光度计在相关研究中发挥了关键作用。该设备设计创新，包括具备八个比色皿位置，极大地提高了测量效率。其可同时测量多个样本的能力避免了遭受实验变量干扰，增强了结果的可靠性。

此外，Cary 3500 的内置方程软件功能能够自动计算 A260/280 比值，进一步提高了分析的吞吐量。该设备的软件与 Agilent OpenLab 软件套件兼容，能有效确保数据的安全获取和存储，符合 FDA 21 CFR Part 11、EU Annex 11 以及其他国家类似的法规要求。这使得 Agilent Cary 3500 分光光度计成为受监管环境中 RNA 质量控制的理想选择。

通过深入探索与技术创新，Agilent 研究团队成功破局难题，为科研人员提供了更为精准、高效率的 RNA 纯度评估手段，确保 RNA 质量控制全流程坚实可靠。更多精彩详情与生物制药领域深度研究，将持续为您放送。

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