药物分析排忧解难系列 | 如何应对极端比例和缓梯度

随着去年中国药典的版本更新，做药物分析检测的老铁们又要迎来新一波的忙碌了，样品、仪器、数据构成了日常工作的“铁三角”，主打一个“稳”不可破。上班上出个三角形稳定性原理也属实是重生之我在实验室学小学数学了。

讲真，虽然小学数学是有点超纲，但好歹三角形还是稳得住，要是真稳不住，那才是叫人欲哭无泪啊，要说实验室里最怕什么不稳，相信每个人都有自己的血泪史，今天，咱就说一个大家都见过的不稳吧，它叫保留时间不稳。

做液相的朋友大概率都有过以下经历：保留时间飘，心率往上飙，保留时间跑，两腿要发抖，担了惊受了怕，咱还得知道液相的保留时间为啥会飘？

如果仪器状态正常，操作也没问题，那大概率就是因为方法本身存在一定的挑战性。这种挑战，通常来自于流动相梯度比例或者变化的极限挑战，比如采用某一相比例低于 5% 的方法，或者是长时间内变化百分之的梯度，这些都属于极端条件。近年来，随着很多检测品种或项目相关法规要求的更新，采用此类极端比例的方法日益增多，这就导致了咱的心脏频繁被挑战，上个班还能体验心律失常，一份班受了两份罪。

对于这种极端比例和缓梯度，可以举个例子，比如 25 版药典当中一款名为碘海醇的品种。

如图为它在有关物质检测项目下的液相色谱梯度条件：

起始 1% 有机相，一个小时梯度变化 12%。若仪器稳定性稍有不足，保留时间便可能出现显著漂移，影响分析结果的可靠性。这种极端情况，已经远远超出一般仪器可以稳定运行的极限。

当常规的仪器配置难以应对此类情况，在实际操作中，经验丰富的实验人员通常会采取以下策略：把梯度起始比例和终止比例的流动相分别手动配成 A、B 两相，也就是 1% 乙腈作为 A，13% 乙腈作为 B，然后把仪器方法设置成从 0% 走到 100% 的线性梯度。通过这种方式，既避免了极端比例，也不会被缓慢的梯度变化困扰，从而有效提升实验效果。

然而，该方法虽然解决了仪器方面的挑战，却又引入了人为操作的不确定性：手工配制流动相难以保证批次间完全一致，而“配液高手”也不可能永远在岗。临时对策虽能应急，却并非长久之计。

真正的解决方案仍需依靠技术进步。如今，已有新技术能够从根本上应对极端比例与缓梯度带来的挑战——Agilent Infinity III 四元泵，针对上述难题提供了稳定、可靠的支持（详情参见下图）。

以碘海醇系统适应性溶液为例，直接按照药典方法进行测试：极端比例缓梯度，重现性大挑战，36 针进样，连跑接近 50 小时不间断。结果显示：主成分外加三个杂质保留时间 RSD% 都在 0.1% 附近，表现效果出色。

结语

极端方法费心，手工配液费力，而 Infinity III 四元泵搭载高精度比例阀和流动控制系统，让您省心又省力。从此，不再畏惧极端比例和超缓梯度，有 Infinity III 在您身边，实验结果就一个字：稳！

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