如有神“柱” | ADC细胞毒素分析新方案

抗体偶联药物(ADC)由靶向特异性抗原的单克隆抗体与小分子细胞毒性药物通过连接子链接而成，兼具传统小分子化疗的强大杀伤效应和抗体药物的肿瘤靶向性。ADC由三个主要部分组成：负责选择性识别癌细胞表面抗原的抗体，负责杀死癌细胞的药物有效载荷，以及连接抗体和有效载荷的连接子。

有效载荷是什么？

作为新型抗体药物，ADC兼具抗体的靶向作用和细胞毒性小分子的良好活性，但因其结构的复杂性和多样性，使得其分析检测及质量控制方面面临的挑战较大。有效载荷是ADC的重要组成部分，在ADC领域的未来发展中，有效载荷多样化将发挥关键作用，其有望将ADC的治 疗武器库开放给其他尚未受益于靶向治 疗的癌症。

开发这些新型有效载荷的一个关键问题是如何减轻它们的副作用。目前批准的ADC已表明，它们具有预期的（骨 髓抑 制、神经毒性）或意想不到的（如眼或肺）毒性。因此，获得令人满意的治 疗指数将是创新ADC有效载荷未来发展的关键。

分析挑战在哪里？

由于连接子（Linker，简称L）的亲水性和有效载荷（Payload, 简称P）的亲脂性，连接子和有效载荷的多手性，连接子的活性碎片和活性杂质会与有效载荷反应，均在不同程度上增加了L+P杂质谱的复杂程度。

基于上述原因，沃特世协助上海皓元医药股份有限公司共同开发了适用于有效载荷的专属分析方法。由于有效载荷与连接子反应时会产生性质相似的杂质碎片，给检测带来了很大的挑战。该方法使用Waters Arc HPLC液相色谱仪，搭配Waters CORTECS T3色谱柱（150mm×4.6mm，2.7μm），分析有效载荷为喜树碱化合物的L+P，结果如图1所示：

图1. 使用沃特世色谱系统与CORTECS T3 色谱柱L+P杂质谱色谱图。

注：1,2号化合物为反应辅料；3-10号化合物为连接子、有效载荷、有效载荷和活性碎片副产物、L+P降解产物等；11、12、14号化合物为多手性连接子引入的异构体杂质等结构相近的副产物；13号为目标化合物；15号为有效载荷反应过程中消旋引入的异构体杂质。

该款沃特世色谱柱在较短的时间内完成L+P复杂杂质谱的分析，大大地提高了分析实验室的工作效率。而使用其他厂家色谱柱时，L+P目标峰附近结构相似的化合物无法满足基线分离的要求，见图2。

图2. 其他厂家色谱柱结果。

性能优异的CORTECS T3色谱柱

由于CORTECS系列色谱柱采用实心核颗粒，柱效更高，且能够灵活、快速地分离多种化合物，即使用于棘手样品也能够发挥更高的分离度。而T3填料的柱子能够使用100%水性流动相并提升极性化合物的保留性能。所以在进行L+P杂质谱这种复杂且挑战的分析时，使用 CORTECS T3色谱柱，真是有如神“柱”！