迎接 2025 版《中国药典》丨安捷伦生物制药解决方案为 ADC 分析提供尖兵利器

2025 版《中国药典》即将颁布和实施，三部生物制品部分新增至少 10 项生物制品通用技术要求，新增 10 个品种各论和修改 80 个已收载品种各论，安捷伦正在持续推出基于 2025 版药典变化的系列应用新方案。其中新增《人用抗体偶联药物制品总论》最为引人关注，本篇主要介绍安捷伦 ADC DAR 值平台分析方法及应用，包括 QTOF 平台（Native SEC-MS 和 RP-MS），HIC-LC 和还原 RP-LC 平台，结合应用场景和平台优势，推荐不同的 DAR 值检测方法平台。

人用抗体偶联药物（ADC）系由抗体和有效载荷（payload）通过连接子（linker）偶联而成的治疗用药物。Drug-to-antibody ratio (DAR)  是每个抗体分子上偶联的有效载荷的平均数量，是 ADC 的最关键质量属性，直接影响其安全性和有效性，因此需要根据连接子和有效载荷的化学性质、偶联方式以及 DAR 异质性高低选择适宜的分析手段。安捷伦开发了针对半胱氨酸偶联 ADC 药物的 DAR 值测定的平台化方案。以维泊妥珠单抗（DAR4）和德曲妥珠单抗（DAR8）为例，我们通过 HIC-HPLC、RP-HPLC 和 Native SEC-Q TOF 和 RP-Q TOF 的四个不同方法，从完整水平和亚基水平检测 DAR 值，结果表明所测 DAR 值有非常高的一致性（图 1 和图 2）。

图 1. 四种方法分析维泊妥珠单抗 DAR 值，A：HIC-HPLC 方法分析 DAR 值，CDS 定制化计算报告自动生成；B：RP-HPLC 方法是将 ADC 还原后，反相色谱分离 ADC 不同亚基后分析 DAR 值，CDS 定制化计算报告自动生成；C：Native SEC Q TOF 方法分析 DAR 值，Bioconfirm DAR calculator 软件自动计算 DAR 值；D：RP Q TOF 方法分析 DAR 值，Bioconfirm DAR calculator 软件自动计算 DAR 值。

图 2. 四种方法分析德曲妥珠单抗 DAR 值，A：HIC-HPLC 方法分析 DAR 值，CDS 定制化计算报告自动生成；B：RP-HPLC 方法是将 ADC 还原后，反相色谱分离 ADC 不同亚基后分析 DAR 值，CDS 定制化计算报告自动生成；C：Native SEC Q TOF 方法分析 DAR 值，Bioconfirm DAR calculator 软件自动计算 DAR 值；D：RP Q TOF 方法分析 DAR 值，Bioconfirm DAR calculator 软件自动计算 DAR 值

HIC-HPLC 检测 DAR 值方法以新一代智能化1260 Infinity III Bio inert LC 或 1290 Infinity III Bio UHPLC 为平台，对超高盐流动相有更好的耐受性。此方法由于使用不挥发高盐流动相，不能直接进入质谱表征，而安捷伦 2D LC MS 技术平台可在不改变一维流动相基础上，二维实现在线除盐后直接连接质谱进行表征，MS 定性后可直接计算 DAR 值。 

RP-HPLC 方法是先将 ADC 进行还原，反相色谱分离 ADC 不同亚基后，VWD 信号计算 DAR 值，此方法可连接 MSD XT 定性还原后的不同轻重链片段，因此也可以根据 TIC 信号计算 ADC DAR 值。HPLC 方法平台以 CDS2 软件控制结合定制化 DAR 计算报告，自动完成 DAR 值计算，保证计算准确性的同时，提高数据处理效率，满足研发和 QC 实验室合规性要求。

以 Native SEC Q TOF 和还原 RP Q TOF 方法检测 ADC DAR 的方法中，DAR 计算由安捷伦 Bioconfirm DAR calculator 软件自动完成，软件以解卷积后的质谱数据自动识别不同 DAR 值峰，将峰积分自动加权计算，即可自动完成 DAR 计算，这样省却了大量手动计算工作同时减少了误差（图 3）。应用安捷伦 LC Q TOF 平台，RP Q TOF 可用于高通量 ADC DAR 值检测，结果稳定。

图 3. Native SEC Q TOF 图谱及（德曲妥珠单抗）ADC Dar 值计算（上）；RP Q TOF 图谱及（德曲妥珠单抗）ADC Dar 值计算（下），红线框为 BioConfirm 软件 DAR calculator 自动计算 DAR 值设置界面，软件以解卷积后的质谱数据自动识别不同 DAR 值峰，将峰积分自动加权计算，即可自动完成 DAR 计算

安捷伦开发的基于 HPLC 和 LC QTOF平台检测 ADC DAR 的四个方法，可应用于 ADC 药物筛选、工艺开发、质量研究和 QC 放行的整个 ADC 药物研发周期。

即将发布的《人用抗体偶联药物制品总论》以及 2024 年发布的《抗体偶联药物药学研究与评价技术指导原则》为 ADC 药物的研究和分析提供了重要指导作用。持续关注安捷伦，我们将不断推出 ADC 药学研究和生物分析方面的解决方案，和您一起探索 ADC 分析中的问题和挑战。

如希望了解更多安捷伦 ADC 分析表征解决方案，请扫码下方二维码获取：

1. 生物制药工作流程解决方案加速 ADC DAR 表征

2. 使用 UHPLC/Q-TOF 联用系统测定抗体药物 偶联物 (ADC) 的药物/抗体比率 (DAR)。

3. 分析抗体-药物偶联物的药物结合位点利用自动化样品前处理与 LC/MS 分析

4. 利用正交分析方法提高抗体药物偶联 物的质量

5. 测定血清纯化所得的抗体药物偶联物的药物/抗体比率

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