western blot失败经验总结

western blot失败经验总结 western blot失败经验总结我做了很久的WB，Zda的一个难点感觉在于样品制备上！蛋白的降解有些时候是你想象不到的，可能出奇的糟 western blot失败经验总结我做了很久的WB，Zda的一个难点感觉在于样品制备上！蛋白的降解有些时候是你想象不到的，可能出奇的糟糕，也可能完全没事~~如果单独做WB的话，感觉以快速彻底裂解，先变性后保存的原则比较有效，尽量选择足够强的裂解液，甚至直接给loading buffer裂解，然后取出部分蛋白定量，其余加入loading buffer100度充分变性，再分装保存有些时候比蛋白酶YZ剂更有效 另一个感觉就是样品中目的蛋白的量，限于WB的检测下限问题，一般目的蛋白量**别低于1ng（虽然ECL法下限是0.1ng，即100pg），**在10ng以上为好这就要求在做WB之前必须充分考虑目的蛋白的可能丰度，**充分的准备工作然后再设计细胞量或者组织量，千万别把样品搞稀了，否则就不好办了 Z后，还是多看文献，在做某个蛋白之前**看看别人是如何做的，有什么特殊要求，内参如何选等等