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2025-11-14 10:48:34美国贝克曼库尔特 CytoFLEX SRT桌面型流式细胞分选仪
果您需要简单易用的仪器来分选多个细胞群，从而获得下游实验所需的目标细胞，那么 CytoFLEX SRT桌面型流式细胞分选仪无疑是很棒的选择，因为它上手快且操作方便。

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2025-01-13 17:45:14自动细胞接种仪使用方法有哪些？
自动细胞接种仪使用方法：提升实验效率与精确度 在现代生物学和医学研究中，细胞培养技术是实验室工作的核心之一。而自动细胞接种仪作为一种高效的实验工具，已被广泛应用于细胞培养过程中，极大地提升了实验效率和准确性。本篇文章将详细介绍自动细胞接种仪的使用方法、注意事项以及其在实际应用中的优势，帮助广大科研人员更好地掌握其操作技巧，提高实验结果的可靠性。 一、自动细胞接种仪的基本原理 自动细胞接种仪通过机械化、自动化的方式来实现细胞的接种。其原理是通过设定好细胞接种的时间、数量、培养皿规格等参数，仪器自动将细胞液均匀地分配到各个培养皿中。这一过程不仅大大节省了实验人员的时间，还能有效避免人为操作误差，提高细胞接种的均匀性与重复性。自动细胞接种仪主要通过吸取细胞悬液、精确计量并将其精确分配到培养皿内，确保每次接种的细胞数目和分布更加均匀。 二、自动细胞接种仪的使用步骤 准备工作 在使用自动细胞接种仪之前，实验人员应首先准备好所需的培养皿、细胞悬液和培养基。确保仪器的各个部件清洁，避免交叉污染。还需检查仪器的设置，确认设备已连接电源并启动。 设置参数 自动细胞接种仪的操作界面一般为触摸屏，用户可以根据实验要求设置细胞接种的相关参数。这些参数包括每个培养皿中的接种细胞数、接种的细胞量（通常以细胞数或细胞密度为单位）、每次接种的时间间隔等。 接种操作 设置完参数后，启动仪器进行接种操作。仪器会自动吸取细胞悬液，通过设定的吸管或分配装置，将细胞均匀接种到各个培养皿中。在整个过程中，仪器会实时监控接种的进度，并根据设置的程序进行调整。 结束与清洁 接种完成后，仪器会发出提示音，通知用户操作结束。接着，用户可以取出已接种的培养皿，放入适宜的培养环境中进行孵育。仪器的各个部分需要按照规定进行清洁和消毒，以避免细胞残留物的堆积。 三、自动细胞接种仪的优势 提高实验效率 自动细胞接种仪能显著减少人工操作时间，提高工作效率。尤其是在大规模细胞培养时，仪器能够快速、地完成接种任务，节省大量的人工成本。 减少人为误差 人为操作往往会导致细胞接种不均匀或细胞数量偏差。使用自动细胞接种仪后，接种过程可以严格按照设定的参数进行，减少了操作中的不确定性和误差，保证了实验结果的可靠性。 提高接种精度 自动细胞接种仪能够精确控制细胞接种的数量和分布，尤其适用于需要高度精确的实验，如高通量筛选、药物测试等领域。仪器的高精度控制确保每个培养皿中的细胞数目均匀，避免了因细胞数量不一致而影响实验结果的情况。 四、使用自动细胞接种仪的注意事项 定期保养与维护 自动细胞接种仪的长期稳定运行需要定期进行维护。用户应根据设备手册的要求，对仪器进行定期清洁、校准和检修，确保仪器的性与稳定性。 注意环境控制 尽管自动细胞接种仪可以减少人为因素的干扰，但细胞培养环境的控制依然至关重要。接种前，应确保培养环境无污染，接种后及时将培养皿放入适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度环境中进行培养。 操作人员培训 尽管自动细胞接种仪具有较高的自动化程度，但操作人员仍需接受专业培训，熟悉仪器的操作流程、参数设置及注意事项，以确保设备的高效运转和实验的成功。 结语 自动细胞接种仪为现代细胞培养提供了、高效的解决方案，已成为生物学、医学研究以及药物开发中的重要工具。通过合理的参数设置和正确的操作方法，科研人员能够更好地提升实验的效率与精度。掌握其使用方法，不仅能降低人工操作的风险，还能为细胞培养实验带来更加可控和可靠的结果。
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2022-03-01 10:17:17新品抢先试 用 | 纳米磁珠细胞分选 ，Get最方便的细胞分选方法！
提到细胞分选实验，大家首先想到就是流式细胞分选，该方法使用荧光抗体标记单细胞悬液，再通过调节合适的电压、补偿等，可以将目的细胞与非目的细胞区分开来。由于可以对多参数、不同荧光强度的细胞进行鉴定、分类、定量和分离，流式分选技术在同时进行多标记的细胞分选时，其地位无可替代。但是当需要快速获得某种分选后的细胞时，流式分选的操作较为复杂，且花费的时间过长，对细胞的刺激也比较大。因此，使用免疫纳米磁珠进行快速细胞分选的方法应运而生，该方法不仅对细胞刺激性小、速度快，而且操作简单，稍等片刻就可快速获得目的细胞。（▲瑞沃德细胞分选新品）新品来袭，自主研发瑞沃德细胞分选产品包括自主研发的磁珠分选试剂盒和细胞分选柱，能在短时间内通过简单、快速的操作分选得到高纯度、高活率的目标细胞。使用流程同时，纳米级别磁珠无需洗脱，分选得到的细胞可直接应用于流式分析、细胞培养、单细胞测序等下游实验。结果展示纯度*注：小鼠脾 脏细胞样本CD3分选后纯度流式检测结果，A为分选后阴性管（流出组分），B为分选后阳性管（滞留组分）。Marker激活情况注：小鼠脾 脏细胞样本CD3分选后激活Marker CD69检测结果，A为分选后Day0检测结果，B为分选后用CD3/CD28单抗激活Day3检测结果应用场景多，助力科学研究免疫学研究肿瘤学研究神经生物学研究干细胞研究细胞治疗四大特点，轻松获取目标细胞1、可获得高纯度，高活率，高得率的目的细胞2、获得细胞可直接用于细胞培养，测序等下游实验3、温和，低刺激，不改变细胞原本生物学特性4、高效便捷，操作简单新品上市开启免费试 用活动小鼠CD3+/ CD4+/ CD8+三种细胞分选试剂盒按需任选，助您更好地细胞分选识别下方二维码，快来申请免费试 用
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2023-08-18 11:00:43如何分辨“真“、”假”全自动细胞计数仪？
  //  上一篇《给大家推荐一种细胞计数仪性能检测的方法》中，我们发现全自动细胞计数仪检测细胞样品的重复性和梯度稀释的结果准确性上，都比半自动插板式细胞计数仪更有优势。那么大家可能会问：“导致这样的性能差异原因是什么呢？另外，目前市场上都自诩所卖的细胞计数仪是全自动的，那我们如何区分哪个是‘真’，哪个又是‘假’的呢？”要回答这2个问题，首先我们需要对图像法细胞计数的过程做下回顾。下面是图像法台盼蓝染色细胞计数和活率分析的基本流程。01细胞吹打混悬后定量吸取样品02等体积吸取台盼蓝吹打染色03染色好的细胞加到血球计数板或细胞计数板上04显微镜下手动或自动统计死活细胞数，然后计算活细胞密度和活率05清洗血球计数板或更换新的细胞计数板传统显微镜下手工细胞计数，以上5步操作都要操作人员来完成。这种方法因为人为操作带来的误差，导致结果差异有时会很大，甚至超出通常可以接受的±10%偏差范围。并且随着样品数越多，操作人员会逐渐造成眼疲劳，无法继续进行有效并准确地计数。手工显微镜法细胞计数的照片和计算方法插板式半自动细胞计数仪的出现，省去了操作人员肉眼统计和分析死活细胞数的步骤，仪器操作只需要将样品混匀、定量染色和上样分析（有时要手动对焦），测试结束后更换新的细胞计数板做下一个样品。用于半自动细胞计数仪的各类细胞计数板移液枪加样的照片半自动细胞计数仪的缺点在于：由于每块细胞计数板的检测样品数量有限，所以检测新的样品需要更换新的板子。但板子批次间存在差异，样品和台盼蓝体积需要手动定量，取样量少代表性差（从30-50mL样品中一般就只吸取20uL样品），染色后的细胞样品通过移液枪加样有时还产生气泡而报废，用后废弃的细胞计数板会产生二次污染物，这些目前都还没有好的处理方法。那有没可能细胞的混匀和染色，以及细胞的计数和分析过程全部实现自动化，同时不用手动更换新的细胞计数板而自动做下一个样品呢？答案是使用全自动细胞计数和活率分析仪。全自动细胞计数仪相比半自动插板式细胞计数仪的优势点小结：01全自动吹打混悬和台盼蓝染色全自动细胞计数仪的一个显著特点是：能够自动完成细胞的吹打混悬和台盼蓝染色。要实现全自动吸取等体积的细胞样品和台盼蓝染料，首先需要由仪器内部的步进马达精确地完成加样体积的控制。其次，因为可以全自动吸取样品，所以全自动细胞计数仪会有1个转盘或孔板放置其他待测样品。对于排在后面的细胞若发生沉降，就需要在测试前对样品进行吹打混悬，以防止细胞沉降导致测试结果出现偏差。而这2步操作，半自动细胞计数仪都只能通过手动来完成，从而引入人为操作误差。同时，Vi-CELL BLU全自动细胞计数仪单个样品检测的取样体积200±20uL，加样体积不需要很准确，仪器自动会完成定量取样。相比半自动细胞计数仪只有10-50uL的取样体积，而且由手动操作完成。取样体积大代表性更好，测试结果更容易接近真实值。02动态百图分析Vi-CELL BLU全自动细胞计数仪测试细胞样品，单个样品拍摄的照片达到了100张，分析的细胞数量更多，1x10e6个/mL的细胞悬液拍摄100张照片的细胞数差不多2600个。单个样品检测拍摄的细胞数越多，检测结果的系统误差越小，测试结果的重复性和准确性也相应更高。其中1张照片（上左图）和100张照片的分析柱状图03高通量和不间断检测全自动细胞计数仪的另一个特点是高通量和不间断检测，即待测样品可以先放到转盘或96孔板上，根据软件中设置好的分析条件，仪器会自动按要求完成细胞的计数和活率分析。Vi-CELL BLU全自动细胞计数和活率分析仪一次最多可以放21个样品（使用24位转盘）或96个样品（使用96孔板）进行分析测试。若使用24位转盘，在检测过程中还可以实现不间断上样测试，即样品测试过程中，还可以放入新的待测样品。综上所述，全自动细胞计数仪在细胞样品混悬和染色方面避免了人为操作带来的误差，同时百图分析拍摄的细胞数多，结果代表性更好。所以，在细胞计数方面重复性和准确性上相比半自动插板式细胞计数仪更有优势。同时，全自动细胞计数仪的高通量和不间断检测功能，又满足实验室样品量大，不同老师共用该仪器的检测需求。并且每个样品测试结束后，仪器会自动进行管路清洗，仪器本身还带有自动过夜清洗功能，使得仪器一直处于待机状态。所以，在操作便捷性上，全自动细胞计数仪也胜过半自动插板式细胞计数仪。以上这些特点可以用于区分我们使用的细胞计数仪是“全自动”还是“半自动”，同时也是为何全自动细胞计数仪性能上要优于半自动的地方。希望大家可以通过这些方法来分辨“真”、“假”全自动细胞计数仪。
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2023-06-09 11:41:52人人都是流式高手：Tumor-infiltrating lymphocytes(TILs) 分选秘籍
Tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) 是指浸润肿瘤组织的淋巴细胞。淋巴细胞是免疫系统中的重要组成部分，负责识别和攻击异常细胞，包括癌细胞。流式细胞术对TILs的分选提供了一个重要的工具，用于表征、纯化和研究浸润肿瘤的免疫细胞群。它有助于研究人员了解TILs的组成、功能和潜在的治 疗相关性，推动我们对肿瘤与免疫相互作用的理解。我们使用流式细胞术来分选TILs主要应用场景如下：01、鉴定和表征：流式细胞术允许我们根据TILs表面标记物的特征来鉴定和表征不同的亚群。通过使用针对CD3、CD4、CD8和其他免疫细胞标记物的特异性抗体来标记细胞，我们可以区分和定量TILs中的各种T细胞亚群。这有助于我们了解肿瘤微环境中TILs的组成和多样性。02、特定TIL亚群的纯化：流式细胞术分选使我们能够分离和纯化感兴趣的特定TIL亚群。通过基于表面标记物的表达，对细胞进行分选和筛选，我们可以收集纯净的TIL亚群用于进一步的下游应用。这使研究人员能够研究特定的TIL亚群，并研究其功能特性或基因表达谱。03、功能分析：分选后的TILs可用于功能性分析，以评估其免疫活性和功能。例如，可以测试分选后的TILs的增殖能力、细胞因子产生、对肿瘤细胞的细胞毒性或其他功能性实验。这些分析提供了有关TIL亚群功能能力和潜在抗肿瘤免疫反应的见解。04、基因组学或蛋白质组学分析：流式细胞术分选可以获得纯净的TIL细胞群，进而进行基因组学或蛋白质组学分析。通过分析分选TILs的基因表达或蛋白质谱，研究人员可以更深入地了解与TILs在肿瘤免疫中相关的分子机制和信号通路。然而不同于外周血、脾 脏中的淋巴细胞，TILs的流式检测存在更多的不确定性，需要有效优化包括样本处理、配色方案、上样条件以及分析方法等实验设计的各个方面，才能实现更为准确、真实的多色复杂样本流式检测。图1为外周血来源样本淋巴细胞分型的流式检测数据，由图可见，淋巴细胞群体T、B细胞分群明显，T细胞亚群也可清晰区分。另外，我们也可以看到，该数据以FSC通道设定阈值，其阈值设定值较低，导致碎片及噪音信号干扰明显，不过由于血液样本碎片较少，与细胞分群明显，故而对最 终结果的影响并不大。图1 血液样本淋巴细胞免疫分型流式数据然而，当我们使用同样的模板检测肿瘤组织样本时，数据就出现了明显问题。实体瘤组织细胞构成复杂，并且在将组织样本制备成单细胞样本的过程中会产生大量的细胞碎片，这些杂质细胞及碎片会对流式检测造成显著的干扰。如图2所示，T细胞中出现了大量CD19和CD3双阳性细胞，不符合已有文献报道的结果。这些双阳性细胞主要是由于杂质细胞及碎片的非特异干扰导致的。这些干扰对于流式检测及流式分选的准确性有很大影响，甚至会导致得出错误的结论。图2 浸润肿瘤组织的淋巴细胞免疫分型流式数据那么，基于以上数据，我们应该如何优化实验设计以提高浸润肿瘤组织的淋巴细胞分选的准确性呢？这里给大家以下几点建议：01、增加Pan-Marker检测：这里的Pan-Marker是指目标细胞群均表达，但其他细胞群体及碎片不表达的表面标记。CD45广泛表达于免疫系统的各个细胞亚群上，但在非免疫细胞上没有表达或表达很低。因此，在检测淋巴细胞等免疫细胞时，可通过检测CD45是否表达来区分免疫细胞及非免疫细胞，以达到排除杂质细胞干扰的目的。02、优化样本制备方案：对复杂样本来讲，样本制备方案是否合适决定了流式实验的成功率。可根据文献报道并通过预实验来选择最 佳的消化酶配方和消化时间，在确保细胞得率的同时尽量减少杂质干扰并最 大限度的保存细胞活性及功能。此外，选择合适的细胞分离手段进行目的细胞的富集。例如，若针对淋巴细胞检测，利用Ficoll或Percoll密度梯度离心法富集单个核细胞，可有效去除脂肪、碎片及杂质细胞的干扰。03、进行Fc封闭：组织浸润的多种细胞，特别是单核/巨噬细胞以及DC细胞高表达抗体Fc端的受体。这些细胞在进行流式抗体标记时，即使不表达相关抗原，也可通过Fc受体非特异性的结合流式抗体的Fc端，从而导致非特异信号。要解决这一问题，可购买商业化Fc封闭试剂，在标记流式抗体前进行Fc封闭即可。04、合理设定阈值：阈值的设定与实验目的息息相关。在流式分析实验中，应当设定阈值去除绝大部分噪音及碎片信号，仅保留少量碎片信号即可。在流式分选实验中，若分选所得细胞用于培养，同样应当设定阈值去除绝大部分噪音及碎片信号，仅保留少量碎片信号，这样做可以有效提高分选效率及回收率；但若分选所得细胞用于qPCR、测序，特别是单细胞测序等基因组学应用，由于碎片中含有一定量的核酸片段乃至细胞核碎片，在分选过程中就需要将尽可能多的碎片与目的细胞区分，因此应当设定较低的阈值以暴露足量的碎片信号让分选仪器检测到，进而有效确保分选所得目的细胞不掺杂核酸碎片，以免影响后续实验准确性。05、利用空白荧光通道排除非特异：什么是空白荧光通道呢?举一个例子，我们设计一个3色实验标记FITC、PE、PE-Cy7三种染料，没有标记APC，在检测时APC通道就是空白通道，是不应该有阳性信号的。复杂样本中的部分杂质细胞有较强的非特异荧光信号，通常这些非特异的荧光信号在所有的流式荧光通道中均可检测到。基于这一原理，我们可在上样时预留一到两个空白荧光通道，样本中的目的细胞没有标记这些空通道的荧光素，在这些通道里面是阴性的，而杂质细胞的非特异信号在空白通道中通常也是阳性的，我们就可以通过设门选择空白通道中的阴性细胞来达到去除非特异信号的目的。需要注意的是，利用这一方法时要充分考虑补偿的影响，最 好选择与已用通道补偿小或无补偿的通道作为空白通道。06、增加细胞死活染料：死细胞的非特异性地结合会增加假阳性。死细胞会产生自发荧光干扰特定信号的检测。在TILs分选中去除死细胞。可以增加数据准确性：死亡的细胞可能会释放细胞碎片和细胞内成分，这可能会干扰实验结果，引入假阳性或假阴性结果。通过去除死细胞，可以提高分选结果的准确性和可靠性。并且为分选后TILs细胞活力提供保证：分选到活细胞可以保证后续实验的有效性和可靠性。死亡细胞不具备正常的生物活性和功能，因此分选到活细胞可以确保后续实验能够反映真实的细胞生物学状态。图3 无死细胞排除处理的样本分析比较图4 有死细胞排除处理的样本分析比较复苏后的PBMC在免疫染色之前不添加（图 3）或者添加ViaKrome 405可固定活性染料（55℃，10分钟）（图 4）。然后，使用Perfix-nc细胞染色试剂盒（型号 B10825）处理细胞，并用Granzyme B-FITC、CD19-PE、CD14-ECD、CD79a-PC5.5、CD3-PC7 和 CD45- Krome Orange 进行染色。 数据统计信息显示：两个不同条件下，门内细胞在上一门级百分比也不一样，充分展示了消除死细胞以后的数据效果。
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2023-07-03 11:42:58人人都是流式高手：GFP分选，这还有我不会的？
很常见的场景如下：细胞转染后，想用流式检测表达GFP细胞的百分比并且分选，但是不同的设门方法让GFP阳性细胞百分比看起来有差异，究竟下面哪种策略才适合呢？今天我们主要讨论一下FSC和SSC上设门对GFP阳性细胞百分比的影响。让我们一个一个设门，把每种情况具体看一下。保持FITC通道上的门不变，我们来看一下在前向和侧向的散点图上设门在不同的位置，代表你选择了什么类型的细胞。只有P1赋予了蓝色，其他门的颜色去掉，这样，我们就可以很方便的看出来细胞群在不同的图上所处的位置。第 一种设门，除了左下角靠近0的碎片不圈，其他基本都圈上，从第二张SSC-A和SSC-H排粘连的散点图可以看出来有单个细胞也有粘连细胞，P2门下 GFP阳性细胞百分比为61.36%。第二种设门，只圈最密集的这一群，从第二张SSC-A和SSC-H排粘连的散点图可以看出来，这部分的细胞基本都是单个的，P2门下 GFP阳性细胞百分比为65.39%，较第 一种高。第三种设门，密集细胞群左边的和左下角靠近0的碎片不圈，只圈右边的这两群，从第二张SSC-A和SSC-H排粘连的散点图可以看出来有单个细胞也有粘连细胞，P2门下 GFP阳性细胞百分比为65.70%，较第 一种高，和第二种差不多，但是稍微高一点。这样分析下来，大家最 大的困惑是这三群细胞要不要圈，怎么圈才是最 好的？让我们在第 一张FSC和SSC的散点图上根据细胞群设三个门。三个门分别为P1、P4和P5，显示了三种不同的细胞群。P1显示为单个细胞，FITC通道上阳性细胞比例为65.54%。P4显示大部分为粘连的细胞，因此在FITC通道上的阳性细胞比例为71.43%，较P1细胞群高，如果分析时加入这群细胞会增加GFP阳性细胞百分比。如果在单克隆分选中选择这群，会导致虽然筛选到阳性细胞，但是单克隆源性降低。P5显示为单个细胞，但是因为FSC较P1小，考虑是细胞状态不好细胞呈现皱缩导致，所以其在FITC通道上的阳性细胞比例为20.15%，较P1细胞群低的多，如果分析时加入这群细胞则会降低GFP阳性细胞百分比。如果加入7AAD染料，这群会呈现出阳性，所以在分选中这群细胞不该圈选，或者在去除死细胞的门中去除。由此可见，如果只想要分析状态好的单个细胞的GFP阳性百分比，那你可以选择P1门的设门方式，当然也可以把P1和P4都选上，再用SSC-A和SSC-H去掉粘连细胞对数据的干扰。练习题如果您在细胞转染后，流式检测表达mCherry细胞的百分比时发现，mCherry通道细胞群并没有呈现明显分开的两群（由于细胞在mCherry通道有较高的自发荧光），要怎么确定mCherry细胞百分比并且分选呢？
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