- 2025-01-10 17:03:54酶联免疫斑点
- 酶联免疫斑点（ELISPOT）是一种基于抗体-抗原特异性反应的免疫学检测技术。它通过在固相支持物上捕获特定细胞分泌的抗体或细胞因子，形成可见的斑点，从而定量检测特异性抗体分泌细胞或细胞因子分泌细胞的数量。ELISPOT具有高灵敏度、高特异性和操作简便等优点，广泛应用于疫苗评估、感染性疾病诊断、自身免疫病研究及癌症免疫治疗监测等领域。该技术能够提供关于免疫应答强度和频率的宝贵信息。
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酶联免疫斑点资讯
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- 《斑点酶联免疫分析仪校准规范》(征求意见稿)
- 本规范适用于支持 96 孔板的斑点酶联免疫分析仪的校准。
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- “斑点酶联免疫分析仪”等3项校准规范通过视频会议审定
- 10月29日全国生物计量技术委员会通过视频会议线上召开了年度第二次规范审定会。
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酶联免疫斑点问答
- 2023-02-07 10:28:38本生牛乳铁蛋白(LF)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
- 本生牛乳铁蛋白(LF)酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围： 96T25μg/mL–850μg/mL 使用目的：本试剂盒用于测定牛血清，血浆及相关样本中乳铁蛋白(LF)含量。 实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛乳铁蛋白(LF)水平。用纯化的牛乳铁蛋白(LF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入乳铁蛋白(LF)，再与HRP标记的乳铁蛋白(LF)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的乳铁蛋白(LF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中乳铁蛋白(LF)浓度。 试剂盒组成 130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液 6ml×1瓶2酶标试剂 6ml×1瓶8标准品(1600μg/mL) 0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液 1.5ml×1瓶4样品稀释液 6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液 6ml×1瓶11封板膜2张 6显色剂B液 6ml×1/瓶12密封袋1个 标本要求 1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽s快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。800μg/mL5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液400μg/mL4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液200μg/mL3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液100μg/mL2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液50μg/mL1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 操作程序总结： 计算 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项 1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6.底物请避光保存。 7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9.本试剂不同批号组分不得混用。 保存条件及有效期1.试剂盒保存：2-8℃。2. 有效期：6个月
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- 2022-03-10 15:26:49人维生素B12（VB12）酶联免疫分析试剂盒
- 人维生素B12（VB12）酶联免疫分析试剂盒本试剂盒仅供研究使用。货号：BS-1522检测范围：96T3pg/ml-180pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中维生素B12（VB12）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人维生素B12（VB12）水平。用纯化的维生素B12（VB12）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入维生素B12（VB12）， 再与 HRP 标记的维生素B12（VB12）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗 涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终 的黄色。颜色的深浅和样品中的维生素B12（VB12）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定 吸光度(OD 值)，通过标准曲线计算样品中人维生素B12（VB12）浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶 2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品(320pg/ml) 0.5ml×1 瓶 3 酶标包被板12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份 5 显色剂 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张 6 显色剂 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2.不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。160pg/ml5 号标准品150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液80pg/ml4 号标准品150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液40pg/ml3 号标准品150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液20pg/ml2 号标准品150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液10pg/ml1 号标准品150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。7. 温育：操作同 3。8. 洗涤：操作同 5。9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间 控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4. 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值 大于标准品孔第一孔的 OD 值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。人维生素B12（VB12）酶联免疫分析试剂盒保存条件及有效期1.试剂盒保存：;2-8℃。2.有效期：6 个月
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- 2022-08-09 11:23:27可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体酶联免疫试剂盒说明书
- 关键词：可溶性肿瘤坏死因子 BUNSEN本生 酶联免疫试剂盒 可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体酶联免疫试剂盒说明书 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中血清素/血清胺(ST)水平。用纯化的血清素/血清胺(ST)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血清素/血清胺(ST)，再与HRP标记的血清素/血清胺(ST)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的血清素/血清胺(ST)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中血清素/血清胺(ST)浓度。 标本要求: 1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 样本处理及要求： 1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果)，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 试剂盒性能： 1. 灵敏度：zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。 2. 特异性：不与其它细胞因子反应。 3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。 操作步骤： 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 80pg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 40pg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 20pg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 10pg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 5pg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 操作程序总结: 计算： 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项： 1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4.请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6.底物请避光保存。 7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9.本试剂不同批号组分不得混用。
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- 2021-12-15 11:12:05人肿瘤坏死因子α(TNF-α)酶联免疫分析使用说明书
- 人肿瘤坏死因子α(TNF-α)酶联免疫分析使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。用纯化的人肿瘤坏死因子α(TNF-α)捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入人肿瘤坏死因子α(TNF-α)，再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肿瘤坏死因子α(TNF-α)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中人肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片2片密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品0.3ml×6管0.3ml×6管2-8℃保存酶标试剂5ml×1瓶10ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存20×浓缩洗涤液15ml×1瓶25ml×1瓶2-8℃保存注：标准品浓度依次为：48、24、12、6、3、0pg/mL.样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞2浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1.标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;。2.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。4.温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。5.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。6.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复5次，拍干。7.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.8.终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。9.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。人肿瘤坏死因子α(TNF-α)酶联免疫分析ELISA试剂盒使用说明书注意事项：1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。样本在使用也要在室温平衡60分钟。2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请乘以总稀释倍数(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。3计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。(此图仅供参考)试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。2.批内变异系数与批间变异系数应分别小于10%和15%。检测范围：1.5pg/mL-48pg/mL灵敏度：检测浓度小于0.1pg/mL保存条件及有效期：1.试剂盒保存：2-8℃。2.有效期：6个月
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- 2022-04-08 13:50:58大鼠5-α还原酶(5AR)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
- 大鼠5-α还原酶(5AR)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：96T0.5pg/ml-35pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中肠炎沙门氏菌抗体(SE-Ab)含量。实验原理本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中5-α还原酶(5AR)水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗抗原，往包被单抗的微孔中依次加入5-α还原酶(5AR)，再与 HRP 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的5-α还原酶(5AR)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，通过标准曲线计算样品中大鼠5-α还原酶(5AR)浓度。大鼠5-α还原酶(5AR)酶联免疫分析试剂盒试剂盒组成130 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7终止液6ml×1 瓶2酶标试剂6ml×1 瓶8标准品(64pg/ml)0.5ml×1 瓶3酶标包被板12 孔×8 条9标准品稀释液1.5ml×1 瓶4样品稀释液6ml×1 瓶10说明书1 份5显色剂 A 液6ml×1 瓶11封板膜2 张6显色剂 B 液6ml×1/瓶12密封袋1 个标本要求1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2.不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。32pg/ml5 号标准品150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液16pg/ml4 号标准品150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液8pg/ml3 号标准品150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液4pg/ml2 号标准品150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液2pg/ml1 号标准品150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。7.温育：操作同 3。8.洗涤：操作同 5。9.显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.10.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。鸡肠炎沙门氏菌抗体(SE-Ab)酶联免疫试剂盒操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4. 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔孔的 OD 值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1.试剂盒保存：;2-8℃。2.有效期：6 个月
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