
- 2025-01-21 09:34:37多色流式细胞分析技术
- 多色流式细胞分析技术是一种先进的细胞分析手段,它利用多种荧光染料标记细胞表面的不同抗原或细胞内的分子,通过流式细胞仪对细胞进行高速、多参数的检测。该技术能够同时分析细胞的多个特性,如大小、形状、表面标志物表达水平等,实现细胞的精确分类和定量分析。多色流式细胞分析技术在免疫学、肿瘤学、血液学等领域具有广泛应用,为疾病的诊断、治疗和预后提供了重要依据。
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多色流式细胞分析技术资讯
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- 直播预告 | 精细免疫分型在健康管理中的应用
- 因应精 准医学世代的来临,使用多色流式细胞分析技术,通过检测精细免疫细胞亚群的种类、数量来评估人体免疫力,了解自身免疫功能状态已成为预防医学不可或缺的工具之一。
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多色流式细胞分析技术问答
- 2022-12-30 11:24:37MICA实现Caspase 3/7多色检测
- Caspases与细胞凋亡过程相关,因此可以利用caspase检测来确定细胞是否正在经历这种程序化的细胞死亡。这些检测可以通过例如流式细胞仪、平板读数仪实现,也可以在显微镜上完成,显微镜可为量化数据补充可见的结构信息。在这篇文章中,我们描述了MICA是如何用于caspase 3/7测定。借助Navigator或像素分类器等工具,MICA让设置、执行和分析caspase 3/7检测变得更加容易,即使没有经验的用户也可轻松操作。图像:双色caspase检测并进行拼接扫描。U2OS细胞用核标记物DRAQ5(品红)和CellEvent™(黄色)标记。加入4mM星形孢菌素以诱导细胞凋亡。20倍物镜下使用双通道荧光,持续16小时每30分钟获取一次2x2 FOV(视野范围)的扫描拼接图像。 引 言 凋亡细胞检测或者活细胞/死细胞检测一般通过将某种物质应用于活细胞并观察细胞反应,以此检测其毒性或有效性。死亡率随时间推移而上升或者剂量依赖性上升均证明物质有效。判断潜在药物的抗 癌效果便是一个典型示例。商用染料试剂盒可检测处于凋亡状态的细胞。这些试剂盒内染料为荧光染料,能够分别标记活细胞和死亡细胞。Caspase活性检测法是细胞凋亡检测法的一种。Caspase(半胱天冬酶)是参与细胞凋亡过程的一类半胱氨酸蛋白水解酶。它们还用于区分caspase介导的细胞凋亡或细胞坏死。这里的染料试剂盒使用的是DNA结合试剂,该试剂的荧光能够被四氨基酸肽(DEVD)阻断。一旦caspase-3和caspase-7(caspase-3/7)被激活,即当细胞处于凋亡状态时,caspase-3和caspase-7便会切割DEVD肽,然后DNA结合试剂便会开始呈现荧光。挑 战 由于添加剂浓度不同、孵育时间不同、染色类型或者细胞系等参数的不同,实验通常在多孔板上进行。这种方法有两个优点,一是能够在一个反应容器中设置多个不同的试验条件,二是只需要极少量的试剂和极低数量的细胞。但是,在实施过程中,用户仍然可能会被不同孔和不同实验的数量混淆。设置多孔板实验时,MICA自带的Navigator工具能够帮助预览。包括可以在虚拟画板上计划并设置每一孔的扫描拼接实验或者延时实验(见图1)。图1:导航工具。Navigator能提供整个样品载体的预览(例如,玻片、培养皿、孔板),并帮助用户设置实验。用户能够在整个孔板上操作导航并进入单孔内,比如界定感兴趣区域或者设计扫描拼接。追踪细胞活动需要使单一荧光通道的时空相关性成像。传统的宽场显微镜一般一次记录一个通道,因此每一个细胞结构只能按顺序、一个接一个地记录下来。这意味着两个不同的结构记录于两个不同的时间点。这对于极速发生的细胞事件来说可能会产生影响,特别是在共定位研究中。同时成像通过在同一时间记录全部荧光的方法规避了这一缺点。对于caspase活性检测法而言,这意味着用户能够观察到,例如在caspase-3/7被激活的瞬间线粒体的反应。MICA能够同时检测四种荧光,使用户可以同时观察到除细胞核、caspase-3/7活性、线粒体等之外的另一个细胞结构(见图5)。最 后,如果想要确定某一特定试剂在诱导caspase介导细胞凋亡时的效果,则需要对caspase检测进行量化。这种量化需要通过专门的外部软件来实现。MICA自带分析解决方案,不需要另外的软件。通过MICA自带的像素分类器,用户能够标记一些感兴趣区域(ROI),人工智能算法可以训练和识别这些区域(见图2)。对于caspase活性检测法而言,细胞核信号可用于确定细胞总数。CellEvent™信号可用于识别caspase介导的凋亡细胞。图2:利用像素分类工具训练MICA识别图像中样品特征。通过在图像中标记示例特征,像素分类器能够训练和划分所有目标物。 方 法 在这一案例研究中, U2OS细胞或者COS7细胞被铺在96孔板,然后培养一整晚的时间。在实验过程中,活细胞分别用DRAQ5、SPY-650-DNA以及TMRE孵育15分钟。之后,更换培养基,在实验结束前使用CellEvent™孵育细胞。每孔内加入凋亡诱导剂星形孢菌素(3 µM–7 µM)。在四色caspase活性检测法中,U2OS细胞被接种在96孔板上并在夜间生长,然后培养一整晚的时间。在实验过程中,活细胞与DAPI和TMRE孵育45分钟。之后,更换培养基,在实验结束前使用CellEvent™和SiR-Tubulin孵育细胞。每孔内加入凋亡诱导剂—星形孢菌素(3 µM–7 µM)。在37℃、5% CO2和~65%湿度的环境中,按照指示的时间间隔和持续时间用MICA进行活细胞成像。使用Navigator工具设定并执行检测。一些实验中会运行扫描拼接(参见视频2)。进行扫描拼接时,研究人员使用的主要策略是“focus Map”;此外,延时实验通过“Keep focus”来保持细胞的聚焦。使用MICA自带的分析功能进行本次实验中的数据分析。其中核心组件之一便是人工智能驱动的像素分类器,该功能位于“Learn”选项。通过像素分类器,用户能够标记其感兴趣区域(ROI),该区域将作为所有要检测的其他区域的示例。如图5所示,细胞核被像素分类器标记并检测。像素分类器同样能够标记并检测线粒体活性标识TMRE和caspase呈阳性的细胞。之后会在整个延时摄影过程中分析这批图像。经过计算之后,MICA会将计算结果以散点图、共定位图、直方图、饼状图、框图或者时间序列图的形式展示在“结果”选项中。图3:在分析过程中,MICA会标记作为样例的感兴趣区域,为人工智能驱动的分析功能提供信息。在此检测法中,细胞核(品红)和caspase阳性细胞(绿色)会被用于训练像素分类器,通过这种方式,像素处理器便有能力分析caspase介导的凋亡细胞比例。 结 果 SPY-650-DNA(标记细胞核)和CellEvent™(标记caspase 3/7活性)两种细胞染料的量化研究揭示了在活细胞实验中发生caspase介导的凋亡细胞。细胞核的数量说明了每张图像中细胞的数量,可与处于凋亡过程中细胞的数量相对应。另一个标记,即TMRE成像过程,揭示了线粒体活性。量化数据(如长度、宽度、面积)显示在采集图像下方的表格中,这些数据可被导出为Excel表格。获取的图像可以在延时成像的每一个时间点上查看,并可以与识别的ROI重叠。三色caspase 3/7活性检测图(图4)显示,细胞核信号在开始的时候增强,之后逐渐减弱。信号增强是因为核染色剂必须与DNA结合,这一结合过程需要一定的时间。另一方面,SPY-650-DNA信号减弱是因为细胞核解体,解体现象见相关图像。其他信号要么随时间增加而增强(CellEvent™),要么随时间增加而减弱(TMRE):caspase介导的凋亡细胞数量增加的同时激活状态的线粒体数量减少。图4:三色caspase 3/7活性检测法量化研究。通过像素分类器检测细胞核、TMRE和caspase阳性细胞,以确定在不同浓度的星形孢菌素下,随着时间的推移发生caspase介导的凋亡的细胞数量。TMRE信号能反映线粒体的健康状态。结果可以多种形式展示,比如时间序列图。用户可以通过MICA一次性对四种荧光成像。在caspase 3/7活性检测法中,这有助于调查凋亡过程中额外的细胞成分的命运—实现100%时空相关性。图5中展示的案例显示,除了细胞核(DAPI)、激活状态的线粒体(TMRE)以及caspase阳性细胞(CellEvent™)以外,也对肌动蛋白细胞骨架(SiR-Actin)进行了染色。高倍率下(63x),用户能够看到,caspase被激活之后,肌动蛋白细胞骨架坍塌。与此同时细胞核以及线粒体停止工作。因为所有通道都是在一次拍摄中获得的,各细胞活动成像之间存在精确联系。图5:四色caspase-3/7检测,用SiR-Actin、TMRE(线粒体活性)、CellEvent™(caspase活性)以及DAPI(细胞核)标记U2OS细胞。在时间点0加入星形孢菌素。在63x高倍、宽场模式以及THUNDER(ICC)成像模式下获得的图像。结 论Caspase活性检测法为研究抗 癌药物提供了新的见解。为了实现这一目标,研究人员必须在保证高时空精 准度的情况下将活细胞从凋亡细胞中区分出来。对于统计上可靠的结果,增加量很有必要。这就是为什么这类实验必须在孔板上进行,也必须进行量化研究。MICA满足以上全部要求。在FluoSync的帮助下,MICA可同时保证多达4种不同的荧光染料可以同时成像,不论是在单一培养皿上,还是在96孔板上。MICA完整的培养系统能够培育活细胞数日,同时其自带的基于人工智能的分析功能也有助于用户获得可靠的数据。参考:FluoSync - a Fast & Gentle Method for Unmixing Multicolour Images, Science Lab, Leica Microsystems (leica-microsystems.com)
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- 2021-01-06 09:46:43多色荧光原位杂交技术(M-FISH)的基本原理及应用
- 荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)是根据核酸碱基互补配对原理,用半抗原标记DNA或者RNA探针与经过变性的单链核酸序列互补配对,通过带有荧光基团的抗体去识别半抗原进行检测,或者用荧光基团对探针进行直接标记并与目标序列结合,利用荧光显微镜直接观察目标序列在细胞核、染色体或切片组织中的分布情况。M-FISH则是在荧光原位杂交基础上发展起来的新技术,它不仅具有FISH的优点,而且克服了FISH的许多局限,其特点是可将多次繁琐的FISH实验和多种不同的基因定位在一次FISH实验中完成。M-FISH能同时检测多个基因,分辨复杂的染色体易位和微小缺失,区分间期细胞多倍体和超二倍体等。M-FISH用激发光谱和吸收光谱不同的荧光索按一定调色方法标记不同的探针,从而对不同靶DNA同时进行定位和分析,并能对不同探针在染色体上的位置进行排序。探针荧光素颜色调配的方法有非调色法,混合调色法和比例调色法。这3种调色法中,比例调色法只需要几种荧光素就可标记多种探针,因而更有发展潜力。染色体描绘、比较基因组杂交、光谱染色体自动核型分析、交叉核素色带分析及多彩色原位启动标记等技术都是在M-FISH的基础上发展起来的。与其他原位杂交技术相比,多色荧光原位杂交具有很多优点,主要体现在:①宜于多靶杂交,可对同一个细胞学制片进行多个探针杂交;②通过在同一个核中显示不同的颜色可一次性显示全部的染色体数量或结构的变化;③能检测到传统显带方法不易发现的亚纤维染色体畸变不仅能够鉴定隐藏的易位和复杂的重拍,而且可以分析与肿瘤发生相关的重要标记染色体及其基因。目前该项技术目前已广泛应用于动植物基因组结构研究,染色体精细结构变异分析,病毒感染分析,微生态分析,肿瘤遗传学和基因组进化研究等许多领域。明美MFISH荧光原位杂交分析系统 就是一款专为荧光显微图像的捕捉和处理而开发的实用图像软件。它搭配不同波段光谱滤光片的荧光显微镜以及高灵敏度的相机可对多种探针信号进行检测成像,还有区域自动曝光,自动着色,信号点增强,一键合成多色荧光通道图像,自定义各种颜色的探针,多焦面信号景深叠加,多层图像位置偏移较正等功能。深圳禾正医院的老师采用了明美的MFISH荧光原位杂交分析系统,检测中用her2/cep17的比值来测定是否有此原癌基因扩增,当HER2/CEP17比值≥2.0时,为HER2阳性;此外老师还定制了双通道荧光模块,可以同时在目镜下观察到红绿两种颜色的信号点,大大提高科室的工作效率。(来源:http://www.mshot.com/article/903.html 广州市明美光电技术有限公司)
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- 2023-02-02 15:00:12温湿度试验箱制冷循环终端技术简要分析
- 对于- 40°C型号能够选用单极·致冷循环系统,,还可以选用复叠式致冷呼吸系统,但单极·致冷循环系统是靠调小制冷压缩机的空调膨胀阀打开度,减少冷媒总流量制人数来降低挥发工作压力(约0.7个大气压力),进而得到更低的挥发溫度的,那样的设计构思要以系统软件的空调制冷量来超过的(空调制冷约只能规范的0.7~0.8),造成致冷高效率低并增加了制冷压缩机的负荷,并且易造成制冷压缩机电磁线圈超温,影响了制冷压缩机的使用寿命。冷藏控制系统设计:获得-20°C下列的超低温时均选用复叠式致冷呼吸系统。为皓天环境试验箱获得超低温而选用二级缩小复叠致冷循环系统的缘故:(1)单极缩小蒸汽致冷循环系统压比的限定单极蒸汽缩小式制冷机组的最之低挥发溫度,关键在于它的冷疑工作压力及压缩比冷媒的冷疑工作压力由冷媒的类型和自然环境物质(如气体或水)的溫度决策,在一般来说,它处在0.7~1.8Mpa范围之内压缩比与冷疑工作压力和挥发工作压力相关,当冷疑工作压力必须时,随之挥发溫度的减少,挥发工作压力也相对降低,因此使压缩比升高,它将造成制冷压缩机排气管溫度的上升,润滑脂变稀,使润化标准化坏,比较严重时乃至会出現结炭和拉缸状况;与此同时,压缩比的扩大将造成制冷压缩机的输气指数减少,空调制冷量降低,具体缩小全过程偏移等熵全过程越来越远制冷压缩机功率提升,致冷指数降低合理性减少将出現下列某些危害。a.一切冷媒,挥发溫度越低,则挥发工作压力也越多低过低的挥发工作压力,有时候将会导致制冷压缩机无法呼吸,或是使外部的气体进到制冷机组。b.当挥发溫度过低时,一些常见冷媒已达凝结溫度,没法保持冷媒的流动性,循环系统。c.挥发工作压力减少,冷媒的比体积扩大冷媒的质量流量降低空调制冷量大大的降低以便得到需要空调制冷量务必扩大呼吸容量,使制冷压缩机容积过度巨大。(2)冷媒热物理学特点的限定。如今温湿度试验箱中单极·致冷循环系统大部分选用的中温冷媒是R404A,在一个大气压下其挥发溫度是46.59C(R22/-40.7°C),但蒸发冷却式冷却器热传导温度差一般取10°C上下(在强制性排风热管散热循环系统下空调蒸发器和内箱的温度差),就是箱里只有制得-36.5°C的超低温。或许,根据降低制冷压缩机的挥发工作压力,能够将R404A冷媒的最之低挥发溫度减少到-50°C;因此要获得- 50°C及下列的超低温时务必选用中温冷媒与超低温冷媒复叠式的致冷循环系统,制得-50°C ~ -80°C的超低温,超低温冷媒通常采用R23它在一个大气压下的挥发溫度是-81.7°C。(3)制冷压缩机电磁线圈热管散热的限定单极制冷压缩机工作中时,在做-35°C上下,由于制冷压缩机的电磁线圈是旋空在制冷压缩机正中间的,这就造成1个难题。-35°C时,制冷压缩机的底压是为负标值,也就是说造成了1个真空值,那样电磁线圈的顶部发热量就沒有方法消散,那样就制冷压缩机表层是非常凉,但是事实上内部,他的溫度是很高的(由于真空泵是最之好的隔热保温物质)!在掌握完为皓天环境试验箱的致冷循环系统技术性以后,在接下去,东莞皓天设备将会就高温试验箱、热冷冲击性环境试验箱等环境试验设备的有关技术性逐一开展新研发,让顾客朋友们把握各类技术性步聚,为更强的搞好各类试验服务项目。
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- 2022-06-22 14:24:28eor 强化采油核磁共振分析技术
- eor 强化采油核磁共振分析技术油井开发的三个阶段一次采油- 在一次采油中,由于原油中存在气体产生的压力,原油被强制排出。二次采油- 在二次采油过程中,储层会受到注水或注气压力的影响,以保持继续将原油输送到地面。三次采油- 也称之为提高采收率(EOR),引入降低粘度和改善流动性的流体。这些流体由能够和油、蒸汽、空气或氧气、聚合物溶液、凝胶、表面活性剂聚合物制剂、碱性表面活性剂聚合物制剂或微生物制剂等混溶的气体组成。eor 强化采油采油过程中向地层中注入流体、能量,以提高产量或采收率为目的的开采方法常被称为“强化采油”即“EOR”。常规EOR采油方法包括水驱、化学驱、气驱、热力采油等,引导CO2作为注气驱油蕞常用的气体之一,由于超临界CO2提高采收率方面优异的表现,以及可以同时完成碳的捕集和封存,受到广泛的关注和探究。eor 强化采油核磁共振分析技术基本原理:核磁共振弛豫按照质子系统进发方向分为横向弛豫和纵向弛豫。核磁共振弛豫与物质分子的结构和动态过程及所处的环境密切相关。由于纵向弛豫在实际测试中测量的时间较长且测点数较少,一般是通过测试横向弛豫曲线(T2谱)来分析岩心样品的物性。核磁共振测试(NMR)直观的探究油相在孔隙中的分布和流动状态。配合多场耦合配件,实现压力、温度对二氧化碳的相态有明显的控制作用。当坏境处于临界温度及临界压力时,CO2会以超临界态的形式存在,他既有气态性质,又有液态性质,能够快速溶解孔隙的有机物,而核磁无法检测到不含H的超临界CO2气体,有效评价储层采收率的提高效果,定量研究油气开采过程。
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- 2021-12-23 10:16:13遇见“Prima”——德国PicoQuant全新推出多色激光器
- 近日,在德国柏林最近的一次网络研讨会上,PicoQuant向大家展示了其最新的激光创新良心之作:独立的、全电脑控制的激光模块Prima。 PicoQuant公司的产品经理Guillaume Delpont阐述了这款激光器的设计初衷:“许多科研人员在工作中都面临着同样的困难,那就是他们需要多个激发波长来研究他们的待测样品,而购买多个激光器又会变得非常昂贵。PicoQuant公司为了给科研人员面临的共同挑战提供解决方案,最终依托自身在激光开发方面长达25年的专业背景和研发实力,创造了Prima—— 一种经济实惠、紧凑的激光模块,可以发出红色、绿色和蓝色的脉冲激光。” Prima—三色皮秒脉冲激光器Prima是一款独立、紧凑、价格合理的激光模块,提供3个独立的发射波长,可以在皮秒脉冲和连续波(CW)模式下工作。皮秒脉冲可以由Prima模块的内部时钟触发,也支持高达200MHz的外部触发。该模块采用全电脑控制,操作非常简单:通过USB端口将Prima连接到PC端,所有操作参数的更改都可以通过一个方便的软件接口完成。 红、绿、蓝:三种最有用的波长Prima可以提供三种波长的激光:640nm、515nm和450 nm。每种颜色都可以单独输出,每次输出一个波长。 这三种颜色是材料科学、化学和生命科学中最常用的3种波长,广泛应用于光谱学或显微镜应用的常规激发,进行种类多样待测样品的研究,其中包括新型纳米材料、量子点、分子和荧光团。 Prima是一款几近完美的工具:当涉及到日常实验室任务时,能够满足您的大多数需求,如寿命或量子产率测量,光致发光和荧光测量等。 灵活多样的工作模式:脉冲、连续和快速开关模式在进行时间分辨或稳态测量的时候,无论您需要哪种类型的操作模式,Prima的灵活性都可以轻松实现。Prima同时也支持快速连续开关功能。脉冲模式支持内触发和外触发,内触发的重频率范围从100 Hz至200 MHz可调,外触发支持的重复频率范围从单次脉冲至200 MHz。 每个波长的平均输出功率高达5mW。在CW工作模式下,每个波长可以达到更高的平均输出功率(高达50 mW)。在CW工作模式下,进行ON和OFF状态切换的上升/下降时间小于3 ns。 恒定的重复频率可以通过内部触发来进行设置,Burst工作模式也可以由合适的外部触发源实现触发(例如,PicoQuant的Sepia PDL 828的振荡器模块)。您甚至可以将Prima与其他激光模块组合使用,从而实现更为复杂的激发模式,不仅包括Burst模式,还包括脉冲交替激发(PIE)或交替激光激发(ALEX)。 这使得Prima成为一个通用的工具,可以在许多环境中使用。 易于使用作为一个独立的激光模块,Prima不需要任何其他外部激光驱动对齐进行控制。其参数设置和操作通过一个基于成熟的Sepia的图形用户界面软件进行全电脑控制。
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