流式细胞术数据分析 - 产品信息 - 相关知识

2025-01-10 17:03:44流式细胞术数据分析: 流式细胞术数据分析是通过流式细胞仪收集细胞样本的荧光信号等参数，运用统计学和计算机技术对数据进行处理和分析，以获取细胞群体的特征信息。它在免疫学、肿瘤学、血液学等领域有广泛应用，可实现对细胞亚群的识别、增殖、凋亡等状态的定量分析，为科学研究及临床诊断提供重要依据。

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深圳市瑞沃德生命科技有限公司 449
2023-01-02
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流式细胞术数据分析问答

2023-05-22 15:19:22如何通过流式细胞术鉴别细菌和病毒感染？: 抗生素的过度使用会导致人类细菌感染对抗生素的耐药性增加，已成为目前全球十大公共卫生威胁之一。根据世界卫生组织（世卫组织）最新报告显示，根据87个国家在2020年报告的数据，常见细菌感染对治疗的耐受性越来越强，导致致命血流感染的细菌耐药性很高，并且造成社区常见感染的几种细菌对治疗的耐受性也在增加。由于临床上很难及时有效地区分细菌和病毒感染，可能是导致抗生素过度使用的原因之一。目前临床上检测感染类型的方法有很多，以下是一些常见的方法：症状和体征：虽然某些症状和体征可能与细菌和病毒感染都有关，但一些症状和体征可能更常见于特定类型的感染。例如，喉咙痛和咳嗽可能是细菌感染的迹象，而流鼻涕和打喷嚏可能是病毒感染的迹象。细菌和病毒检测：医生可以通过分析患者的血液、尿液或其他生物体液样本来检测细菌或病毒的存在。细菌感染可以通过培养细菌并观察其在培养基上的生长来检测，而病毒感染通常需要使用特殊的检测方法，例如PCR（聚合酶链式反应）。白细胞计数：细菌感染通常导致白细胞计数升高，而病毒感染则不一定如此。C反应蛋白（CRP）和其他生化指标：在细菌感染中，CRP和某些细胞因子等其他生化指标通常会升高，而在病毒感染中，它们通常会保持正常水平或轻微升高。这些方法可以帮助临床医生在一定程度上区分细菌感染和病毒感染，但在灵敏度、特异性、操作便捷性和报告及时性仍存在一定的挑战，因此研究者们也一直在寻找更及时有效的检测方法，这一次，研究者们把目光聚焦在对机体对感染的免疫应答上！免疫系统作为机体对抗外来病原体的重要防线，会对感染做出及时响应，通过观察免疫细胞在感染中的免疫应答是否也可以及时有效地区分细菌和病毒感染？先天免疫系统是免疫应答的第一道防线，髓系细胞，如粒细胞、单核细胞、NK细胞、DC，有助于先天免疫系统识别入侵的病原体和组织损伤。这些细胞在与微生物和损伤模式（PAMP、DAMP）接触时被激活，引发强烈的炎症反应，并释放各种促炎介质，如细胞因子、干扰素（IFN）和特异性细胞标志物。这是由先天免疫系统提供的对感染的即时反应。研究表明当机体受到细菌或病毒攻击时，先天免疫系统的髓样细胞会做出不同的反应1。在机体受到炎症刺激、自身免疫疾病、细菌或病毒感染后激活干扰素（I型和II型）信号传导，I型和II型干扰素（IFN）是调节免疫反应的核心参与者，I型IFN介导病毒性免疫应答，II型IFN介导细菌性免疫应答。因此，髓系细胞活化指标是感染早期检测的理想标志。图1病毒和细菌感染的特异性干扰素应答；I型IFN（IFNα、IFNβ）：病毒感染；II型IFN（IFNγ）：细菌感染CD169、CD64和HLA-DR是中性粒细胞、单核细胞、树突状细胞等髓样细胞表达的活化标志物，它们在感染检测和免疫功能评估中具有重要作用。CD169，也称为Siglec-1，是一种膜上糖蛋白，属于蛋白质家族Siglec。CD169主要表达在树突状细胞和巨噬细胞的表面，并与细胞外病毒颗粒的糖基结构特异性结合，促进病毒的吞噬和清除。因此，CD169在感染检测中具有重要作用。研究表明，病毒感染后，CD169的表达水平会上调，这表明CD169可能是一种早期的病毒感染指标。在肝炎病毒和爱滋病毒感染中，CD169的表达与病毒的传播和清除有关。因此，检测CD169在病毒感染中的表达水平可以帮助了解病毒感染的程度和病情。图2 CD169+髓细胞对先天免疫和适应性免疫不同细胞亚群的潜在影响2。CD169+的表达是由病毒感染后的I型IFN信号诱导，启动下游IFN途径，促进病毒滴度控制和适应性免疫细胞启动和募集。有研究显示，外周血单核细胞CD169的检测可以作为COVID-19高敏及快速筛查的方法3。图3 根据疾病分期和SARS-CoV-2 RT-PCR结果，与健康献血者相比，新冠肺炎患者单核细胞CD169的表达3。方框图A-C总结了健康献血者（HBD，n=25，绿点）与新冠肺炎患者早期（A，黑点）、晚期（B，蓝点）或无症状（C，红点）的CD169指数水平（单核细胞与淋巴细胞信号的比率）与RT-PCR结果的比较；蓝线表示阳性阈值（3.5）。图D计算每组的ROC曲线，然后计算3.5阈值下的灵敏度、特异性、PPV(positive predictive value)和NPV（negative predictive value）。CD64是一种Fcγ受体，也称为FcγRI。CD64主要表达在单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞的表面，可以结合抗体的Fc部分，并在体内介导胞吞作用和抗体介导的细胞毒作用。CD64的表达水平可以反映细菌或真菌感染的严重程度，CD64感染指数是一种用于评估感染严重程度的生物标志物。在临床上，CD64感染指数已被广泛应用于评估感染的早期诊断、疾病监测和预后评估4。通过流式细胞术检测CD169与CD64的表达可以帮助急诊科对感染类型的鉴别进行临床研究评估5。图4 三组不同患者nCD64和mCD169的表达差异5。图A 第一组（无感染）、第二组（细菌感染）和第三组（病毒感染）中性粒细胞上CD64的表达。图B 对于相同的三组，CD169在单核细胞上的表达。数据以平均误差和标准误差表示。使用t检验计算各组之间的p值，如果p≤0.05，则显示显著差异。MFI表示平均荧光强度。HLA-DR是人类白细胞抗原中的一种MHC II分子，主要在抗原呈递细胞（如树突状细胞、巨噬细胞、）表面表达，参与调节T细胞免疫应答。在感染疾病中，HLA-DR的表达水平可以发生变化6-7，主要表现为以下两种情况：增加：HLA-DR的表达增加通常发生在早期感染阶段，是机体对感染的一种免疫反应。感染时，免疫细胞受到刺激后会释放促炎性因子，这些因子会刺激抗原呈递细胞表达HLA-DR，从而引发T细胞免疫应答。HLA-DR的增加也可以作为评估感染早期诊断和严重程度的生物标志物。降低：HLA-DR的表达降低则常常发生在感染的晚期阶段，是机体免疫功能的抑制反应。在感染后的几天或几周，免疫细胞受到长期的刺激和激活，容易导致抗原呈递细胞功能异常和免疫耗竭。这时，HLA-DR的表达通常会下降，表明机体的免疫反应受到了抑制。HLA-DR的降低也可以作为评估感染后免疫抑制状态的生物标志物。为了帮助研究者更及时有效地对感染早期的免疫应答进行评估，从而帮助鉴别细菌和病毒感染，贝克曼库尔特也推出了一款3色的髓系活化检测试抗体组合(货号C63854)*用于外周血的髓系活化标志物进行检测。该试剂方案无需进行补偿操作，支持免洗检测，检测过程便捷高效一步到位。除了可用帮助区分细菌感染和病毒感染之外，还于以下领域的研究：抗生素耐药性：感染源和感染性质识别错误问题严重，易导致抗生素滥用和机体耐药性8。利用nCD64快速识别细菌感染，将有助于生物标志物的研究和新抗生素的开发9。病毒性疾病进展：髓系细胞活化标志物（CD169）已广泛应用于病毒性疾病的进展监测和病毒清除，如HIV和肺部病毒感染，包括COVID-19 10-13。干扰素信号传导：干扰素是一类细胞因子介质，在感染时向细胞免疫系统报警。I型和II型干扰素对髓样细胞的作用取决于炎症刺激程度13-14。自身免疫性炎症性疾病：研究表明，在RA、SLE、干燥综合征等系统性自身免疫性疾病出现的慢性炎症中，干扰素介导的信号传导发挥免疫调节等重要作用15。如果您对这个方案感兴趣请点击左下角“阅读原文”与我们联系，或者联系贝克曼库尔特的业务代表了解更多信息！ ● 参考文献： 1.Bourgoin P, Biéchelé G, Ait Belkacem I, Morange PE, Malergue F. Role of the interferons in CD64 and CD169 expressions in whole blood: Relevance in the balance between viral- or bacterial-oriented immune responses. Immun Inflamm Dis. 2020;8(1):106-123.2.Herzog S, Fragkou PC, Arneth BM, Mkhlof S, Skevaki C. Myeloid CD169/Siglec1: An immunoregulatory biomarker in viral disease. Frontiers in Medicine. 2022;9.3.Michel M, Malergue F, Belkacem IA, Bourgoin P, Morange PE, Arnoux I, Miloud T, Million M, Tissot-Dupont H, Mege JL, Busnel JM. An ultra-sensitive, ultra-fast whole blood monocyte CD169 assay for COVID-19 screening. medRxiv. 2020 Oct 26:2020-10.4.Ajmani S, Agarwal V, Gurjar M. State of Globe: Neutrophil CD64: Is It a Reliable Biomarker for Sepsis? J Glob Infect Dis. 2018 Apr-Jun;10(2):33-34.5.Bourgoin P, Soliveres T, Ahriz D, Arnoux I, Meisel C, Unterwalder N, Morange PE, Michelet P, Malergue F, Markarian T. Clinical research assessment by flow cytometry of biomarkers for infectious stratification in an Emergency Department. Biomarkers in Medicine. 2019 Nov;13(16):1373-86.6.Juskewitch, J.E., Abraham, R.S., League, S.C., Jenkins, S.M., Smith, C.Y., Enders, F.T., Grebe, S.K., Carey, W.A. and Huskins, W.C., Monocyte HLA-DR expression and neutrophil CD64 expression as biomarkers of infection in critically ill neonates and infants. Pediatric research,2015; 78(6), pp.683-690.7.Gatti, A., Fassini, P., Mazzone, A., Rusconi, S., Brando, B. and Mistraletti, G., Kinetics of CD169, HLA-DR, and CD64 expression as predictive biomarkers of SARS-CoV2 outcome. Journal of Anesthesia, Analgesia and Critical Care, 2023;3(1), pp.1-10.8.Shallcross LJ, Davies DS. Antibiotic overuse: a key driver of antimicrobial resistance. Br J Gen Pract. 2014 Dec;64(629):604-5.9.Ajmani S, Agarwal V, Gurjar M. State of Globe: Neutrophil CD64: Is It a Reliable Biomarker for Sepsis? J Glob Infect Dis. 2018 Apr-Jun;10(2):33-34.10.Akiyama H, Ramirez NP, Gibson G, et al. Interferon-Inducible CD169/Siglec1 Attenuates Anti-HIV-1 Effects of Alpha Interferon. J Virol. 2017;91(21):e00972-17.11.Stegelmeier AA, van Vloten JP, Mould RC, Klafuric EM, Minott JA, Wootton SK, Bridle BW, Karimi K. Myeloid Cells during Viral Infections and Inflammation. Viruses. 2019 Feb 19;11(2):168.12.Bedin AS et al. Monocyte CD169 expression as a biomarker in the early diagnosis of COVID-19, medRxiv 2020.06.28.20141556.13.Park MD. Macrophages: a Trojan horse in COVID-19? Nat Rev Immunol. 2020 Jun;20(6):351.14.Hadjadj J, Yatim N, Barnabei L, et al. Impaired type I interferon activity and inflammatory responses in severe COVID-19 patients. Science. 2020;369(6504):718-724.15.Rose T, Szelinski F, Lisney A, et al. SIGLEC1 is a biomarker of disease activity and indicates extraglandular manifestation in primary Sjögren's syndrome. RMD Open. 2016;2(2):e000292.

2022-05-30 11:01:25【免费直播】流式细胞术1小时带你弄懂，助你攻克实验难题！: 单细胞样本制备老失败？流式实验得到数据不可靠？流式图不知道怎么分析？「全线赋能“沃”的实验」之实验方法实战教程直播第四期将带来《流式细胞术》从单细胞制备到流式细胞术，理论+实例带你快速get到其中的难点要点直播时间5月31日（周二）19：00报名方式识别上方二维码，立即免费报名主题：单细胞悬液样本的分类及制备单细胞悬液样本类型制备注意事项制备方法实例讲师：冯启峥瑞沃德高级产品方案经理，专注动物传染病学和细胞与分子免疫学研究多年，在动物疫苗研发、CRISPR的原核细胞应用方面有着较为丰富的经验，致力于为客户提供专业的细胞与分子生物研究方案。主题：流式细胞术的原理及应用仪器基本结构解析实验方法实操讲解技术应用介绍讲师：方晟昆明理工大学硕士研究生，已发表SCI论文4篇，在载体构建、药物活性筛选、肿瘤模型构建、单细胞数据分析等方面有着丰富的经验，研究方向主要是抗肿瘤药物的抗癌机理和单细胞测序分析。上期直播间互动问题这次我们全部为小伙伴解答1、做外周神经损伤的小鼠能活多久？如何饲养？外周神经损伤一般不会造成动物的死亡，但一些特殊情况会影响动物的存活率，比如为了避免在手术部位引起不良组织炎症，我们应该尽量缩短手术时间，如果手术部位意外出血，要用棉签适当按压。如果出血没有停止，就不要对这只动物进行进一步的实验。术后动物应该放进干净的鼠笼并分笼饲养，注意保温。2、脊髓损伤造模后，动物出现功能障碍不能自主排尿该如何护理？每日按压排尿3次，以防泌尿系统感染；连续3天，每天两次向腹腔注射相同剂量青霉素预防感染。3、使用纤维蛋白胶修复的是外周神经损伤的哪个类型或者说等级呢?纤维蛋白胶可以应用于横断的神经，帮助受伤神经的近端和远端残端紧密对齐，是神经缝合技术的一种替代方式。4、坐骨神经挤压的结扎力度如何把控？有一些文献上会使用带有力值的工具进行挤压神经，如果我们没有这类的工具，可以使用血管夹对神经进行夹持，保证力度的一致性。5、有专门评估大小鼠前肢抓取能力的行为学实验吗?针对于前肢的抓取能力，爪抓力测试仪可以测动物前肢，后肢的抓力，另外如果是判断动物前肢抓取食物的精细运动，可以用楼梯式抓取测试仪来进行。6、目前好像2D步态分析居多，慢慢也看到了3D步态分析，两者相比各自有什么优缺点呢?步态没有2D、3D的区别，国内使用较多的步态有2种：第一种是依靠压力感应可以生成动物脚掌受力的情况，判断动物的损伤情况；第二种是通过视频记录动物足部在运动时的轨迹，通过足部的运动过程计算生成动物活动过程中四肢运动的各项指标来判断动物的损伤情况。这两种方法从2个不同的方面完善了步态的分析数据，但实际上无法互相替代。一般来说大鼠步态用第一种压力感应测试的会多一些，小鼠步态则用视频记录的多一些。所谓的3D步态是通过从侧面拍摄动物运动时的腿部活动，对动物的步态运动进行更为细致的评估，与传统步态记录的是2个维度的信息，无法进行替代。由于需要识别动物腿部的关节，目前无法与足底步态很好的融合结果。7、这种转棒实验是可以大小鼠通用的吗？如何检测到掉落？转棒大小鼠主机通用，但是跑道是需要替换的。设备通过红外感应，电子感应等自动检测动物掉落情况，停止计时。8、外周神经损伤会导致疼痛致敏，在模型检测中可以用什么疼痛检测方法呢？主要看测痛的部位，机械痛一般可以用vonfery针或电子测痛仪来进行测试，针对不同部位也有面部疼痛测试仪（三叉神经），压感测痛仪（背部，较大的关节），钳式测痛仪（整个脚，细小的关节），热痛一般测试动物足底或尾部，使用红外测痛仪或者甩尾测痛仪。9、怎么手动排尿？按摩膀胱。10、每天需要按摩多久？术后需轻轻按摩挤压膀胱进行排尿，每次按摩到排空，每天至少三次。11、不规则梯和错步分析仪是不是指一个东西啊？是一种类型的仪器，不同厂家的名称，测试方法，输出的指标会略有不同。12、转棒实验一直做不出差异怎么办？可能有2种原因：①测试时动物已经恢复到与正常鼠一致的水平，所以做不出差异。解决方法：将转棒测试时间提前。②测试难度过于简单或者过于困难，导致差异很小，从而统计分析结果无差异。解决方法：调整实验难度，直到可以做出差异的结果。新型转棒仪除了原先的匀速和匀加速以外还增加了阶段加速等测试方法，实验难度有了更大的调整空间。13、两爪及四爪攀爬实验有合适的实验设备吗？不规则梯结合自制实验设备。14、脊髓损伤后有哪些评估手段？脊髓损伤后可通过行为学对运动及感觉进行评估。BBB法：一般用于观察大鼠后肢行走及肢体活动，评分分为三个部分，0-7分评判动物后肢关节活动情况，8-13分评判后肢步态及协调功能，14-21分评判运动中爪的精细活动；BMS评分是在BBB评分基础上针对小鼠的运动特点做出了完善和修改，是专门用于小鼠后肢功能的评分方法。其他运动相关行为学：步态分析系统用于评估步态动力学、协调性分析、平衡性分析等；转棒仪可评估动物的运动协调性；行走障碍分析仪可分析简单步态及运动协调性等。感觉功能相关行为学：Vonfrey测痛针用于评估对触碰的敏感性；冷热盘用来测试动物对冷热刺激的敏感度。15、平衡木也可以做小鼠吗？有小鼠平衡木可以进行小鼠实验。16、请问外周神经损伤后有哪些手段可以评价感觉功能的损失？感觉功能相关行为学：机械痛一般可以用vonfery针或电子测痛仪来进行测试，评估对触碰的敏感性，针对不同部位也有面部疼痛测试仪（三叉神经），压感测痛仪（背部，较大的关节），钳式测痛仪（整个脚，细小的关节），热痛一般测试动物足底或尾部，使用红外测痛仪（用于量化对小鼠和大鼠后爪辐射或红外热刺激的热阈值的方法）或者甩尾测痛仪（一种基于对啮齿动物中热刺激回避反应的潜伏期测量的疼痛实验）。↓↓本期直播记得预约噢，全程免费还可进群轻松获取后续科研直播课信息以及更多丰富学术干货~▼分享下图到朋友圈，让更多师兄师弟师姐师妹get到流式实验干货，精彩不容错过哟~