在这一过程中，OCT4 蛋白水平的变化，成为判断细胞状态转折的核心证据。作者正是通过高质量的免疫荧光实验，捕捉到了 OCT4 在不同细胞群体中的精细差异 。蛋白的鉴定往往是“决定结论走向”的关键节点，所谓顶级研究，恰恰最怕“工具不可靠”。
蛋白的信号看起来在下降，但你不确定是不是背景
同一条件下，有的细胞亮、有的细胞弱
实验重复性不好，但你很难说清楚是“生物差异”还是“抗体差异”
在这项研究中，OCT4 的角色非常关键：它不是用来证明“这是干细胞”，而是用来判断多能性是否正在被打破。作者观察到，在某些基因编辑条件下：并非所有细胞同时失去 OCT4而是出现 OCT4 信号下降的细胞亚群。这一差异，正是命运转折的关键证据。
对实验而言，这意味着：你必须相信看到的“弱信号”，而不是怀疑“是不是抗体不行”。在该研究中，作者选用了 Invitrogen OCT4 抗体 进行免疫荧光检测，正是为了确保这些细微变化是可信的生物学信号，而非技术噪音。
另外譬如，判断神经元“成熟没成熟”，不能靠直接观察。Map2 阳性还不够，作者进一步引入了 GluR1 这一功能相关标志：在分化受阻的条件下，GluR1 阳性神经元显著减少。
从而说明这些细胞并未真正完成神经功能成熟 。这类实验对抗体的要求往往比“阳性证明”更高。Invitrogen GluR1 抗体 被用于这一关键验证步骤。
真正决定 IF 可信度的，往往是“你最容易忽略的那一层”
当实验需要同时检测：OCT4 / SOX2或Map2 / GluR1，这意味着多重免疫荧光是必选项了。在这种情况下，荧光二抗的稳定性往往决定了：
图像是否干净
信号是否线性
不同样本是否可比较
这篇研究中，多次使用了 Invitrogen Alexa Fluor 系列荧光二抗 来完成多重免疫荧光染色。他们在高分文献中被反复采用，原因很简单：它们的性能足够稳定，以至于作者无需在方法部分做额外解释。
参考文献：
Nazim et al. Alternative splicing of a chromatin modifier alters the transcriptional regulatory programs of stem cell maintenance and neuronal differentiation. Cell Stem Cell (2024).
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