Copure|猪肉中磺胺类药物残留的检测

• 称取5g猪肉样品置于50mL离心管中，加入15mL乙酸乙酯涡旋振荡20min，5000r/min离心10min，上清液收集于50mL离心管中，再加入10mL乙酸乙酯重复提取1次，合并乙酸乙酯层。在提取液中加入5mL 0.1mol/L盐酸溶液，将乙酸乙酯层进行45℃氮吹干，向离心管中加入2mL 0.1mol/L盐酸溶液，涡旋混匀；再加入5mL正己烷，手动振摇20次，4000r/min 离心5min，弃去正己烷，下层水相作为待净化液。

  
  

• Tips：a.氮吹乙酸乙酯前需先加入0.1mol/L盐酸溶液，使磺胺离子化，以免氮吹过程损失，提取液浓缩尽量选择氮吹，避免使用旋蒸。

  
  

• b.正己烷除脂过程中，离心后易出现乳化，观察分层界面是否清晰，若下层水相体积少于7mL，极有可能有部分乳化现象，先不要分离出正己烷层，再加入5mL正己烷振摇后离心。

  
  

• c. 0.1mol/L盐酸溶液：量取8.3mL浓盐酸，用水定容至1L。

• 色谱柱：（Copure? 磺胺专用柱，150mg/6mL）

  
  

• 活化：使用前依次用3mL甲醇、3mL 0.1mol/L盐酸活化柱子

  
  

• 上样：将待净化液转移至固相萃取柱中

  
  

• 淋洗：依次用2mL0.1mol/L盐酸、2mL 甲醇-乙腈（50-50）溶液洗涤小柱

  
  

• 洗脱：用6mL 5%氨化甲醇洗脱，收集洗脱液。

  
  

• 复溶：洗脱液于45℃下氮气吹干（备注：氮吹时间不宜过长，避免目标物损失），残留物用1mL 0.1%甲酸水-甲醇（9:1）溶液复溶，超声1min后涡旋混匀，过0.22μm亲水型PTFE微孔滤膜后，供LC-MS/MS检测, 采用溶剂标曲内标定量。

• 分别量取适量磺胺中间液1μg/mL和2种磺胺内标中间液，用 0.1%甲酸水-甲醇（9:1）溶液逐级稀释成5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL，其中内标浓度为40ng/mL的标准工作液（除磺胺二甲异噁唑、磺胺喹恶啉、磺胺间二甲氧嘧啶以氘代磺胺间二甲氧嘧啶-D6为内标，其他磺胺类物质均以氘代磺胺邻二甲氧嘧啶-D3为内标）。

• 仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）

• 色谱柱：Copure?兽残专用HPLC柱（2.1 mm×100 mm，3μm）

• 流动相：A：水（0.1 %甲酸） B：含0.1 %甲酸的甲醇-乙腈溶液（甲醇:乙腈=2:8）

• 洗脱方式：梯度洗脱，见表1

• 流速：0.4 mL/min

• 柱温：35℃

• 进样量：3μL

• 质谱条件

• 离子源：HESI

• 电喷雾电压：3500 V

• 鞘气压力：40 arb

• 辅气压力：2 arb

• 离子传输管：380 ℃

• 辅气温度：350 ℃

• 定性、定量离子对见表2

5

 检测结果

20ng/mL 曲线中多种磺胺类物质总离子流图

添加浓度为6μg/kg猪肉样品中多种磺胺类物质总离子流图