在细胞培养工作中,我们经常遇到一些容易成团的贴壁细胞,这些细胞在消化后容易聚集成团,严重影响细胞生长和实验结果的可靠性。针对这一常见问题,技术部总结了一套高效实用的处理方法,今天我们就来详细介绍这一方法及其在不同细胞系中的应用。
易成团贴壁细胞的常见类型
根据日常售后反馈,以下几类细胞尤其容易出现成团问题:266-6小鼠胰腺腺泡细胞、U87MG人脑星形胶质母细胞瘤细胞、LNCAP人前列腺癌细胞、C666-1人鼻咽癌细胞、TU686和TU212人喉癌细胞。这些细胞在消化后往往不是以单个细胞形式存在,而是形成大小不一的细胞团块。
细胞成团的原因分析
人恶性胶质瘤细胞;U87 MG(货号:FH0162)
细胞本身特性:某些细胞表面表达高水平的细胞粘附分子,自然倾向于聚集生长。
消化过度:胰酶处理时间过长会导致细胞损伤,反而增加成团可能性。不同类型细胞所需消化时间差异很大。
消化不足:细胞未完全回缩变圆就强行吹打,会导致细胞受损成团。
吹打不当:过度暴力吹打或吹打方式不正确会损伤细胞,导致细胞聚集在一起形成团块。
技术部推荐的静置沉降法
针对这一难题,富衡实验室提供了专门的解决方案:“细胞消化后,用巴氏管轻柔吹打制成细胞悬液,然后静置一段时间,待成团细胞沉降后,吸取上层液体进行传代”。
这一方法的科学依据在于:细胞团块由于重量较大,在重力作用下会先沉降到容器底部,而上层悬液中主要为单个细胞,从而实现了团块与单细胞的分离。
操作步骤详解
标准消化:弃去旧培养液,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。加入适量胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA),置于37℃培养箱中消化适当时间。
温和吹打:加入完全培养基终止消化后,用巴氏吸管轻柔吹打细胞,使之完全脱落并形成细胞悬液。注意吹打力度要轻柔,避免产生大量气泡。
静置沉降:将细胞悬液转移至离心管,静置十几分钟至1小时(具体时间需根据细胞成团情况灵活调整)。
吸取上层悬液:待成团细胞沉降到管底后,小心吸取上层细胞悬液用于传代。
后续处理:下层团块可根据实验需求决定是否重新消化或舍弃。
预防细胞成团的额外技巧
人鼻咽癌细胞;C666-1(货号:FH1098)
除了上述核心方法外,以下技巧也能帮助减少细胞成团问题:
优化消化步骤:对于特别敏感的细胞,可采用“预吸附法”——加入胰酶作用10-40秒后弃去,依赖残余的胰酶消化细胞。
添加剂使用:在消化液里加入EDTA可以减少细胞成团的现象。对于难消化细胞,可考虑使用2%利多卡因消化5-8分钟。
离心参数:离心速度不宜过高,通常1000-1200rpm离心3-5分钟即可。过高的离心力会加剧细胞成团。
结语
贴壁细胞成团是细胞培养中的常见问题,但通过技术部提供的静置沉降法,结合个性化的参数调整,完全能够有效解决。关键是要根据每种细胞的特性,耐心优化消化时间和吹打力度,逐步积累经验。如果您在细胞培养过程中遇到其他问题,欢迎随时联系我们的技术支持团队,我们将竭诚为您提供专业的技术指导和解决方案。
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