有效检测病毒滴度是病毒研究与诊断中非常关键的工作。目前,较为常用的病毒滴度检测方法主要包括qPCR法、TCID50法、PFU法。但这些检测方法操作繁琐,耗时较长,对操作者有较高的技术要求。因此,一种快速、可靠的病毒滴度检测方法无疑会极大地简化研究人员的病毒定量工作。
基于荧光标记和纳米颗粒跟踪分析技术的新方法F-NTA(fluorescence-based Nanoparticle Tracking Analysis)法,既可以通过荧光信号特异性地识别病毒颗粒,又可以借助NTA技术简单可靠的实验操作来快速实现病毒颗粒的定量检测,这为病毒研究领域的研究人员提供了一个新颖的病毒定量检测方法。
本文以热灭活的野生型冠状病毒(SARS-CoV-2 B.1,如图1)和δ突变型冠状病毒为例,演示了通过F-NTA方法快速完成病毒定量的过程。文中所有实验均在生物安全等级2级(BSL-2)的实验室条件下完成。
图1:野生型冠状病毒SARS-CoV-2 B.1的电镜图片
图2:冠状病毒的结构
冠状病毒表面有刺突蛋白(如图2),可以通过Alexa FluorTM 488对刺突蛋白进行抗体荧光标记。抗体荧光标记完成后,通过ZetaView PMX-420 QUATT分别在散射光模式和荧光模式下对野生型冠状病毒和δ突变型冠状病毒进行NTA检测。检测结果如图3所示:野生型冠状病毒在散射光模式下测得的粒径值(X50)是118.6nm,浓度是4.5*109个/ml,在荧光模式下测得的粒径值(X50)是115.7nm,浓度是5.3*108个/ml;δ突变型冠状病毒在散射光模式下测得的粒径值(X50)是119.1nm,浓度是1.2*109个/ml,在荧光模式下测得的粒径值(X50)是125.5nm,浓度是1.6*108个/ml。
图3:野生型冠状病毒(上)和δ突变型冠状病毒(下)分别在ZetaView散射光模式(灰色)和荧光模式(红)下的检测结果
由此结果可以看出,表面带有刺突蛋白的真实病毒颗在所有颗粒中的占比并不是很高,样品中存在大量类似的干扰颗粒。即便如此,通过F-NTA的方法也可以从众多颗粒中直接、快速地检测到真实的病毒颗粒信息。相比于传统的病毒定量方法,F-NTA方法操作简单方便,数据稳定性更好,在实际研究中的应用也将会越来越广泛。
△ 作为目前最新款的NTA产品,ZetaView不仅能实现传统NTA技术对纳米颗粒粒径和浓度的表征,还能测定样品在特定条件下的Zeta电位,为样品稳定性和表面修饰结果提供可靠的数据支持。在荧光标记实验中,ZetaView不仅能实现传统NTA技术对某个标志物的表征,还能通过配备双激光或四激光,在单次进样中,同时完成多个标志物的鉴定,并提供可靠的共定位(Colocalization)检测结果,帮助用户更全面地了解标志物表达情况,助力用户深度挖掘更多的标志物信息。
相比于传统的NTA产品,ZetaView不仅功能更全面,其操作和维护也更加简单方便。它可以实现自动清洗、自动校准,样品池无需拆卸,即可完成快速清洗。这些特点都在更大程度地帮助用户减少操作时间、提高实验效率,加速用户的研究进度。ZetaView也因此而备受用户的青睐。
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